一种制备肌氨酸氧化酶的方法及应用

引用

摘要：

本发明公开了一种制备肌氨酸氧化酶的方法，该方法包括：改造全基因合成人源化肌氨酸氧化酶编码基因序列，去除大肠杆菌稀有密码子；将改造后的肌氨酸氧化酶编码基因序列插入表达载体中，并用大肠杆菌菌株转化表达；将转化表达菌株接种于LB培养基，IPTG诱导；所得菌体破菌，离心分离，过Ni-NTA柱纯化；本发明制备肌氨酸氧化酶操作非常简单，制备成本低，成品产率高，纯度高而且具有高生物活性，作为诊断试剂用于肌氨酸检测试剂盒的研制。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201210578481.5

申请日期：2012-12-28

公开/公告号：CN103013941A

公开/公告日：2013-04-03

主分类号：C12N9/06(2006.01)I

申请/专利权人:卫生部北京医院

发明/设计人:刘明;王萌;张传宝;肖飞;王大光

主申请人地址:100062 北京市东城区大华路1号

国别省市代码:北京;11

权利要求：

一种制备肌氨酸氧化酶的方法，其特征在于，该方法包括：1)改造并全基因合成人源化肌氨酸氧化酶编码基因序列，去除大肠杆菌稀有密码子；2)将步骤1)中改造后的肌氨酸氧化酶编码基因序列插入表达载体中，并用大肠杆菌菌株转化表达；3)将转化表达菌株接种于LB培养基，IPTG诱导；4)所得菌体破菌，离心分离，过Ni??NTA柱纯化；其中，步骤1)中改造后的全基因合成人源化肌氨酸氧化酶编码基因序列为：ATGGCTTCTT??CTACTGGTGA??TCGTTCTCAG??GCTGTTCGTC??ATGGTCTGCG??TGCGAAAGTTCTGACCCTGG??ACGGCATGAA??CCCGCGTGTT??CGTCGCGTCG??AATACGCCGT??GCGTGGCCCGATCGTTCAGC??GTGCTCTGGA??ACTGGAACAA??GAACTGCGTC??AGGGCGTTAA??AAAGCCGTTCACCGAGGTTA??TCCGCGCCAA??CATCGGCGAT??GCCCAGGCTA??TGGGTCAGCG??TCCTATCACCTTCCTGCGCC??AGGTCCTGGC??GCTGTGCGTA??AACCCAGACC??TGCTGAGCTC??TCCGAACTTCCCGGACGACG??CTAAGAAACG??TGCGGAACGC??ATCCTGCAGG??CATGCGGTGG??CCACAGCCTGGGCGCTTACA??GCGTTTCCTC??CGGTATCCAG??CTGATTCGTG??AAGATGTTGC??CCGTTACATCGAGCGCCGTG??ATGGCGGTAT??CCCGGCGGAC??CCTAACAACG??TATTCCTGTC??TACCGGTGCGTCCGATGCCA??TTGTTACCGT??TCTGAAGCTG??CTGGTGGCTG??GCGAGGGTCA??CACCCGTACCGGTGTCCTGA??TTCCGATTCC??ACAGTATCCG??CTGTATTCTG??CTACTCTGGC??TGAACTGGGTGCGGTGCAGG??TAGACTATTA??CCTGGATGAG??GAGCGCGCTT??GGGCGCTGGA??CGTCGCAGAGCTGCACCGCG??CACTGGGCCA??GGCACGTGAC??CACTGCCGTC??CGCGTGCGCT??GTGCGTGATTAACCCGGGCA??ACCCGACGGG??CCAAGTTCAG??ACCCGTGAAT??GCATCGAAGC??TGTGATTCGTTTTGCTTTCG??AAGAACGTCT??GTTCCTGCTG??GCGGACGAAG??TTTATCAGGA??CAACGTTTACGCAGCCGGTA??GCCAGTTTCA??TTCTTTCAAG??AAAGTTCTGA??TGGAAATGGG??TCCGCCGTATGCGGGTCAGC??AAGAACTGGC??ATCCTTCCAC??TCTACCTCCA??AAGGTTATAT??GGGTGAGTGTGGCTTCCGTG??GTGGTTATGT??TGAAGTAGTT??AATATGGACG??CGGCTGTGCA??GCAGCAGATGCTGAAGCTGA??TGTCTGTGCG??CCTGTGCCCG??CCTGTGCCGG??GTCAAGCCCT??GCTGGATCTGGTTGTGTCTC??CGCCTGCTCC??GACTGATCCG??TCCTTCGCAC??AATTCCAGGC??TGAGAAACAGGCCGTTCTGG??CGGAACTGGC??AGCGAAAGCC??AAACTGACGG??AACAAGTGTT??CAACGAAGCGCCGGGTATCT??CCTGCAATCC??GGTACAAGGC??GCGATGTATA??GCTTCCCGCG??CGTTCAGCTGCCGCCACGCG??CAGTAGAACG??TGCACAGGAA??CTGGGCCTGG??CTCCGGACAT??GTTCTTCTGTCTGCGCCTGC??TGGAAGAAAC??CGGTATTTGC??GTTGTACCTG??GCAGCGGCTT??CGGTCAACGTGAAGGTACTT??ACCACTTCCG??TATGACCATC??CTGCCTCCGC??TGGAAAAACT??GCGTCTGCTGCTGGAAAAGC??TGTCCCGTTT??TCACGCGAAA??TTCACTCTGG??AATATTCTTA??G

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