一种三疣梭子蟹呼肠孤病毒的快速纯化方法

摘要：

本发明公开了一种三疣梭子蟹呼肠孤病毒的纯化方法，特点是具体步骤如下：取患病死亡的三疣梭子蟹置于8-10倍体积的高盐TNE2缓冲液中，匀浆直至完全碎裂；将匀浆后的组织悬液分装离心管中，离心收集上清液，将离心所得沉淀再次匀浆离心，收集上清液；合并两次离心所得上清液经8000g，4℃离心20min，取上清液于4℃，35000g离心1.5h，将离心所得的沉淀的上层疏松部分用TM2缓冲液小心冲洗掉，下层白色沉淀部分重悬于TM2缓冲液中；将浸泡后的下层白色沉淀部分重新完全悬浮起来，4℃下3500g离心5min，取上清液于重复上一步步骤，得到的下层结实的纯白色部分即纯化病毒粒子。优点是高效、快速、简便、低成本。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201210576754.2

申请日期：2012-12-26

公开/公告号：CN103013932A

公开/公告日：2013-04-03

主分类号：C12N7/02(2006.01)I

申请/专利权人:宁波大学

发明/设计人:李登峰

主申请人地址:315211 浙江省宁波市江北区风华路818号

专利代理机构:宁波奥圣专利代理事务所(普通合伙) 33226

代理人:程晓明

国别省市代码:浙江;33

权利要求：

一种三疣梭子蟹呼肠孤病毒的纯化方法，其特征在于采用多次差速离心的纯化方式纯化病毒，具体步骤如下：(1)??取患病死亡的三疣梭子蟹解剖，取内脏与鳃剪碎后，置于预先冰浴过的8??10倍体积的高盐TNE2缓冲液中，匀浆直至完全碎裂；(2)??将匀浆后的组织悬液分装于50ml离心管中，4℃??6000g离心10min，收集上清液，将离心所得沉淀的用高盐TNE2缓冲液重悬，再次匀浆数分钟，4℃??6000g??10min离心，收集上清液；将两次离心所得上清液合并；(3)??将合并后的上清液经8000g，4℃??离心20min，取上清液；(4)??将步骤（3）得到上清液于4℃??，35000g离心1.5h，将离心所得的沉淀的上层疏松部分用TM2缓冲液小心冲洗掉，下层白色部分重悬于1??3ml的TM2缓冲液中，4℃冰浴过夜；(5)??将浸泡后的下层白色沉淀部分重新完全悬浮起来，4℃下3500g离心5min，弃去沉淀；取上清液于4℃下，38000g离心1.5h；将离心得到的沉淀上层疏松部分用TM缓冲液小心冲洗掉，下层结实的纯白色部分即纯化的三疣梭子蟹呼肠孤病毒粒子。