一种制备乳酸脱氢酶的方法及应用

摘要：

本发明公开了一种制备乳酸脱氢酶的方法及应用，该方法包括：改造全基因合成人源化乳酸脱氢酶编码基因序列，去除大肠杆菌稀有密码子；将改造后的乳酸脱氢酶编码基因序列插入表达载体中，并用大肠杆菌菌株转化表达；将转化表达菌株接种于LB培养基，IPTG诱导；所得菌体破菌，离心分离，过Ni-NTA柱纯化；本发明制备乳酸脱氢酶操作非常简单，制备成本低，成品产率高，纯度高而且具有高生物活性，作为抗原物质可进行动物免疫，筛选相关抗体，同时为尽快建立国内临床化学诊断急需的校准品制备平台，研制诊断试剂标准物质和参考品奠定基础。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201210567475.X

申请日期：2012-12-25

公开/公告号：CN103014028A

公开/公告日：2013-04-03

主分类号：C12N15/53(2006.01)I

申请/专利权人:肖飞

发明/设计人:肖飞;黄薇

主申请人地址:100062 北京市崇文区东花市南里东区本家润园7号楼2单元301室

国别省市代码:北京;11

权利要求：

一种制备乳酸脱氢酶的方法，其特征在于，该方法包括：1)改造全基因合成人源化乳酸脱氢酶编码基因序列，去除大肠杆菌稀有密码子；2)将步骤1)中改造后的乳酸脱氢酶编码基因序列插入表达载体中，并用大肠杆菌菌株转化表达；3)将转化表达菌株接种于LB培养基，IPTG诱导；4)所得菌体破菌，离心分离，过Ni??NTA柱纯化；其中，步骤1)中改造后的全基因合成人源化乳酸脱氢酶编码基因序列为：1??????ATGGATCATC??ATCATCATCA??CCACGAAAAC??CTGTATTTTCAGGGCGCAAC??TCTAAAGGAT61????CAGCTGATTT??ATAATCTTCT??AAAGGAAGAA??CAGACCCCCCAGAATAAGAT??TACAGTTGTT121??GGGGTTGGTG??CTGTTGGCAT??GGCCTGTGCC??ATCAGTATCTTAATGAAGGA??CTTGGCAGAT181??GAACTTGCTC??TTGTTGATGT??CATCGAAGAC??AAATTGAAGGGAGAGATGAT??GGATCTCCAA241??CATGGCAGCC??TTTTCCTTAG??AACACCAAAG??ATTGTCTCTGGCAAAGACTA??TAATGTAACT301??GCAAACTCCA??AGCTGGTCAT??TATCACGGCT??GGGGCACGTCAGCAAGAGGG??AGAAAGCCGT361??CTTAATTTGG??TCCAGCGTAA??CGTGAACATC??TTTAAATTCATCATTCCTAA??TGTTGTAAAA421??TACAGCCCGA??ACTGCAAGTT??GCTTATTGTT??TCAAATCCAGTGGATATCTT??GACCTACGTG481??GCTTGGAAGA??TAAGTGGTTT??TCCCAAAAAC??CGTGTTATTGGAAGCGGTTG??CAATCTGGAT541??TCAGCCCGAT??TCCGTTACCT??AATGGGGGAA??AGGCTGGGAGTTCACCCATT??AAGCTGTCAT601??GGGTGGGTCC??TTGGGGAACA??TGGAGATTCC??AGTGTGCCTGTATGGAGTGG??AATGAATGTT661??GCTGGTGTCT??CTCTGAAGAC??TCTGCACCCA??GATTTAGGGACTGATAAAGA??TAAGGAACAG721??TGGAAAGAGG??TTCACAAGCA??GGTGGTTGAG??AGTGCTTATGAGGTGATCAA??ACTCAAAGGC781????TACACATCCT??GGGCTATTGG??ACTCTCTGTA??GCAGATTTGGCAGAGAGTAT??AATGAAGAAT841????CTTAGGCGGG??TGCACCCAGT??TTCCACCATG??ATTAAGGGTCTTTACGGAAT??AAAGGATGAT901????GTCTTCCTTA??GTGTTCCTTG??CATTTTGGGA??CAGAATGGAATCTCAGACCT??TGTGAAGGTG961????ACTCTGACTT??CTGAGGAAGA??GGCCCGTTTG??AAGAAGAGTGCAGATACACT??TTGGGGGATC1021??CAAAAGGAGC??TGCAATTTTA??A