一种制备肌酸激酶同工酶的方法及应用
本发明公开了一种制备肌酸激酶同工酶的方法及应用，该方法包括：改造全基因合成人源化肌酸激酶同工酶编码基因序列，去除大肠杆菌稀有密码子；将改造后的肌酸激酶同工酶编码基因序列插入表达载体中，并用大肠杆菌菌株转化表达；将转化表达菌株接种于LB培养基，IPTG诱导；所得菌体破菌，离心分离，过Ni-NTA柱纯化；本发明制备肌酸激酶同工酶操作非常简单，制备成本低，成品产率高，纯度高而且具有高生物活性，作为抗原物质可进行动物免疫，筛选相关抗体，同时为尽快建立国内临床化学诊断急需的校准品制备平台，研制诊断试剂标准物质和参考品奠定基础。
发明专利
CN201210567474.5
2012-12-25
CN103014034A
2013-04-03
C12N15/54(2006.01)I
肖飞
肖飞;黄薇
100062 北京市东城区东花市南里东区本家润园7号楼2单元301室
北京;11
一种制备肌酸激酶同工酶的方法，其特征在于，该方法包括：??1)改造全基因合成人源化肌酸激酶同工酶编码基因序列，去除大肠杆菌稀有密码子；??2)将步骤1)中改造后的肌酸激酶同工酶编码基因序列插入表达载体中，并用大肠杆菌菌株转化表达；??3)将转化表达菌株接种于LB培养基，IPTG诱导；??4)所得菌体破菌，离心分离，过Ni??NTA柱纯化；??其中，步骤1)中改造后的全基因合成人源化肌酸激酶亚单位CKM编码基因序列为：??1????????ATGGGCCCAT??TCGGTAACAC??CCACAACAAG??TTCAAGCTGA??ATTACAAGCC??TGAGGAGGAG??61??????TACCCCGACC??TCAGCAAACA??TAACAACCAC??ATGGCCAAGG??TACTGACCCT??TGAACTCTAC??121????AAGAAGCTGC??GGGACAAGGA??GACTCCATCT??GGCTTCACTG??TAGACGATGT??CATCCAGACA??181????GGAGTGGACA??ACCCAGGTCA??CCCCTTCATC??ATGACCGTGG??GCTGCGTGGC??TGGTGATGAG??241????GAGTCCTACG??AAGTTTTCAA??GGAACTCTTT??GACCCCATCA??TCTCGGATCG??CCACGGGGGC??301????TACAAACCCA??CTGACAAGCA??CAAGACTGAC??CTCAACCATG??AAAACCTCAA??GGGTGGAGAC??361????GACCTGGACC??CTAACTACGT??GCTCAGCAGC??CGCGTCCGCA??CTGGCCGCAG??CATCAAGGGC??421????TACACGTTGC??CCCCACACTG??CTCCCGTGGC??GAGCGCCGGG??CGGTGGAGAA??GCTCTCTGTG??481????GAAGCTCTCA??ACAGCCTGAC??GGGCGAGTTC??AAAGGGAAGT??ACTACCCTCT??GAAGAGCATG??541????ACGGAGAAGG??AGCAGCAGCA??GCTCATCGAT??GACCACTTCC??TGTTCGACAA??GCCCGTGTCC??601????CCGCTGCTGC??TGGCCTCAGG??CATGGCCCGC??GACTGGCCCG??ACGCCCGTGG??CATCTGGCAC??661????AATGACAACA??AGAGCTTCCT??GGTGTGGGTG??AACGAGGAGG??ATCACCTCCG??GGTCATCTCA??721????ATGGAGAAGG??GGGGCAACAT??GAAGGAGGTT??TTCCGCCGCT??TCTGCGTAGG??GCTGCAGAAG??781????ATTGAGGAGA??TCTTTAAGAA??AGCTGGCCAC??CCCTTCATGT??GGAACCAGCA??CCTGGGCTAC??841????GTGCTCACCT??GCCCATCCAA??CCTGGGCACT??GGGCTGCGTG??GAGGCGTGCA??TGTGAAGCTG??901????GCGCACCTGA??GCAAGCACCC??CAAGTTCGAG??GAGATCCTCA??CCCGCCTGCG??TCTGCAGAAG??961????AGGGGTACAG??GTGGCGTGGA??CACAGCTGCC??GTGGGCTCAG??TATTTGACGT??GTCCAACGCT??1021??GATCGGCTGG??GCTCGTCCGA??AGTAGAACAG??GTGCAGCTGG??TGGTGGATGG??TGTGAAGCTC??1081??ATGGTGGAAA??TGGAGAAGAA??GTTGGAGAAA??GGCCAGTCCA??TTTAG??步骤1)中改造后的全基因合成人源化肌酸激酶亚单位CKB编码基因序列为：??1??????ATGGGTCCAT??TTAGCAATTC??TCACAACGCA??CTGAAACTGC??GCTTTCCGGC??TGAAGATGAG??61????TTCCCGGACC??TGTCCGCACA??TAACAACCAC??ATGGCTAAAG??TTCTGACTCC??GGAACTGTAC??121??GCAGAACTGC??GCGCAAAATC??TACCCCGAGC??GGCTTTACTC??TGGACGACGT??AATCCAGACC??181??GGCGTGGATA??ACCCGGGTCA??CCCATATATC??ATGACCGTTG??GTTGTGTTGC??CGGCGATGAA??241??GAAAGCTACG??AAGTCTTCAA??AGACCTGTTC??GATCCGATTA??TCGAAGATCG??CCACGGCGGT??301??TACAAACCAA??GCGATGAACA??CAAAACCGAT??CTGAATCCAG??ACAACCTGCA??GGGTGGCGAC??361??GATCTGGATC??CGAACTACGT??ACTGTCTAGC??CGTGTGCGCA??CCGGCCGTTC??TATCCGCGGT??421??TTCTGTCTGC??CACCGCACTG??TTCCCGTGGT??GAACGTCGTG??CCATCGAAAA??ACTGGCTGTG??481??GAAGCTCTGT??CCAGCCTGGA??TGGTGACCTG??GCAGGTCGTT??ATTATGCGCT??GAAGAGCATG??541??ACCGAAGCCG??AACAACAACA??GCTGATCGAT??GATCACTTCC??TGTTCGACAA??GCCTGTTTCT??601??CCGCTGCTGC??TGGCTTCTGG??TATGGCGCGC??GACTGGCCGG??ACGCACGTGG??CATTTGGCAT??661??AACGACAACA??AAACGTTCCT??GGTGTGGGTC??AACGAAGAAG??ACCACCTGCG??TGTAATTTCT??721??ATGCAGAAAG??GTGGCAACAT??GAAAGAAGTT??TTCACCCGTT??TTTGCACCGG??CCTGACCCAG??781??ATTGAAACTC??TGTTCAAATC??TAAAGACTAT??GAATTTATGT??GGAACCCGCA??CCTGGGTTAT??841????ATTCTGACCT??GTCCGTCCAA??CCTGGGTACT??GGCCTGCGTG??CGGGTGTGCA??CATTAAGCTG??901????CCGAACCTGG??GTAAACATGA??AAAGTTCAGC??GAGGTCCTGA??AACGCCTGCG??TCTGCAGAAG??961????CGTGGTACGG??GCGGTGTTGA??TACTGCAGCC??GTTGGTGGTG??TGTTCGACGT??TAGCAACGCG??1021??GATCGTCTGG??GCTTCTCTGA??AGTTGAACTG??GTTCAGATGG??TTGTTGATGG??CGTGAAACTG??1081??CTGATTGAGA??TGGAACAGCG??TCTGGAACAG??GGTCAGGCTA??TTGATGACCT??GATGCCGGCA??1141??CAAAAATAG??。