一种利用缩短后L2蛋白标签纯化重组蛋白的方法
本发明利用缩短后的L2蛋白与小分子泛素样修饰物(SUMO)融合伴侣用于目标蛋白的纯化。由于采用了能特异性吸附含硅材料和阳离子交换树脂的缩短后的L2蛋白，可以利用廉价的含硅材料或离子交换树脂快速的从发酵液或细胞破碎液中分离出目的融合蛋白，然后在带纯化标签的SUMO蛋白酶的作用下，快速的将目的蛋白从融合蛋白上释放出来。此过程只需简单的过滤，旋液分离，或离心操作，易于大规模放大。
发明专利
CN201210562155.5
2012-12-20
CN103060359A
2013-04-24
C12N15/70(2006.01)I
江南大学
杨严俊;苏宇杰;李俊华
214122 江苏省无锡市蠡湖大道1800号
江苏;32
一种利用缩短后L2蛋白标签纯化重组蛋白的方法，其特征是由缩短后L2蛋白(L2s)基因和SUMO基因融合编码的融合伴侣，其氨基酸序列如SEQ??ID??NO.1所示。由缩短后L2蛋白(L2s)基因和SUMO蛋白酶基因融合编码的L2s??SUMO蛋白酶，其氨基酸序列如SEQ??IDNO.2所示。其制备方法为：(1)将L2s??SUMO??编码基因或L2s??SUMO蛋白酶或带其它纯化标签(如聚阳离子标签，聚组氨酸标签等)的SUMO蛋白酶编码基因克隆到原核表达载体pET28a(+)目的蛋白基因克隆到SUMO后面，构建表达质粒；(2)将所述表达质粒转化大肠杆菌菌株BL21(DE3)或Rosetta(DE3)，并进行培养表达；(3)对所述大肠杆菌进行超声破碎或高压匀浆，裂解菌液进行低温离心，取上清液；(4)将所述上清液L2s??SUMO??目的蛋白或L2s??SUMO蛋白酶与硅微粉，石英粉，珍珠岩，氧化铝，凹凸棒土，高岭土，硅胶，硅藻土，离子交换树脂等吸附材料混合，吸附一段时间，然后清洗至清洗液中无杂蛋白，将吸附L2s??SUMO??目的蛋白的吸附材料与纯化的L2s??SUMO蛋白酶或聚阳离子标签纯化的SUMO混合，搅拌或震荡一段时间后，离心或过滤，上清液中即是释放出的目的蛋白。