一种ROS1融合基因的筛查方法

摘要：

本发明属于医药和生物技术领域，涉及ROS1融合基因的筛查方法，尤其是ROS1融合基因筛查的多片段引物及其应用。本发明的ROS1融合基因筛查方法，以样本中的总RNA反转的cDNA为模板，加入核苷酸编码序列如SEQ ID NO 1-22所示的real-time PCR联合引物，进行实时荧光聚合酶链反应，并通过检测反应产物中反应单位间Ct值的差值检验是否具有ROS1融合基因突变。本发明方法具有操作简捷，节约时间，结果判断直观、明确，成本较低，污染减少的特点。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201210507409.3

申请日期：2012-11-30

公开/公告号：CN103352070A

公开/公告日：2013-10-16

主分类号：C12Q1/68(2006.01)I

申请/专利权人:复旦大学附属肿瘤医院

发明/设计人:陈海泉;孙艺华;王瑞;潘云建;胡海川;王磊;叶挺;罗晓阳;李航;张扬

主申请人地址:200032 上海市徐汇区东安路270号

专利代理机构:上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙) 31268

代理人:吴桂琴

国别省市代码:上海;31

权利要求：

一种ROS1融合基因突变的筛查方法，其特征在于，其包括如下步骤：（1）设计筛查ROS1融合基因的11对real‑time PCR联合引物对或探针；（2）提取样本中的总RNA；（3）以样本中的总RNA为模板，通过逆转录方法合成cDNA；（4）在11个real‑time PCR反应单位中，以（3）中所得的cDNA为模板，分别加入（1）中设计的11对引物或探针，以及包括荧光染料在内的反应预混液；（5）在real‑time PCR反应仪上进行real‑time PCR反应，并分别记录每个样本的10个反应单位的荧光阈值；（6）分别计算引物或探针I～IV所在反应体系的荧光阈值的均值CtABP，和引物或探针VI~XI所在反应体系的荧光阈值的均值CtBBP；（7）计算ABP与BBP之差的绝对数，判定样本是否具有ROS1融合基因突变。