一种(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的生物制备方法
本发明涉及一种(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的生物制备方法,其以4-氯-3-羰基丁酸乙酯为底物,使该底物在生物催化剂、辅因子及氢供体的存在下发生不对称还原反应生成(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯,生物催化剂为重组酮还原酶,氢供体为异丙醇,所述不对称还原反应在pH为7.0~9.0的水相缓冲液和甲苯的混合体系中进行,水相缓冲液与甲苯的体积比为4~20:1。本发明方法解决了传统生物法中需要额外加入辅酶体系、有机溶剂加入过多、催化效率低以及成本高的问题。该方法反应条件温和,反应效率高,操作简便,反应底物的浓度可以提高至40%,大大提高了制备(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的效率和降低了反应的成本。
发明专利
CN201210465009.0
2012-11-19
CN102925501A
2013-02-13
C12P7/62(2006.01)I
苏州汉酶生物技术有限公司
鞠鑫;唐圆圆
215600 江苏省苏州市张家港市国泰北路1号F栋2楼
苏州创元专利商标事务所有限公司 32103
孙仿卫%汪青
江苏;32
一种(S)?4?氯?3?羟基丁酸乙酯的生物制备方法,其以4?氯?3?羰基丁酸乙酯为底物,使该底物在生物催化剂、辅因子及氢供体的存在下发生不对称还原反应生成(S)?4?氯?3?羟基丁酸乙酯,其特征在于:所述生物催化剂为重组酮还原酶,该酮还原酶的制备方法为:将含有酮还原酶基因的重组大肠杆菌单菌落接种到含氨苄青霉素抗性的液体LB培养基中,于35~40℃下活化8~12小时,将活化后得到的培养物接种到含氨苄青霉素抗性的液体LB培养基中,于35~40℃下振荡培养,培养至OD600值达到0.6~0.8时,加入诱导剂,于25~33℃下继续培养8~12小时,离心,收集沉淀物,加入磷酸盐缓冲液得悬浮液,将悬浮液置于冰水浴中超声破碎8~12分钟,再离心,将上清液预冻至温度降至?10℃~?25℃,然后再冻干24~48小时,即得冻干粉状的重组酮还原酶;所述的氢供体为异丙醇,所述不对称还原反应在pH为7.0~9.0的水相缓冲液和甲苯的混合体系中进行,其中,水相缓冲液与甲苯的体积比为4~20:1。