一种利用双荧光素酶报告基因筛选血管生成相关microRNA的方法

摘要：

本发明公开了一种利用双荧光素酶报告基因筛选血管生成相关microRNA的方法，其中，该方法包含：步骤1，进行目标细胞的培养和铺板；步骤2，配置microRNA/DNA/脂质体的混合物，对步骤1所述的细胞进行共转染；步骤3，进行荧光素酶活性检测；该步骤3包含：将步骤2所得的共转染后的细胞，用一种含有VEGFA基因3′UTR与报告基因的重组质粒，以及一种海肾荧光素酶载体分别进行转染；然后将得到的细胞经过培养后，进行收集；将所收集的细胞进行裂解；取15-20μl细胞裂解液于离心管中，加入工作液，然后用发光仪进行测读。该报告基因为萤火虫荧光素酶基因。本发明提供的方法，可用来筛选血管生成相关的microRNA、研究血管生成与microRNA之间的作用机理以及研究肿瘤细胞血管生成的机制等。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201210461112.8

申请日期：2012-11-16

公开/公告号：CN102899421A

公开/公告日：2013-01-30

主分类号：C12Q1/68(2006.01)I

申请/专利权人:上海中医药大学附属普陀医院

发明/设计人:殷佩浩;李琦;邱艳艳;周利红;刘宣;王炎;秦建民;侯黎莉;梁波;胡送娇;包益洁;陈星竹;靳宝辉;宋大迁;叶乃菁;王一斐

主申请人地址:200062 上海市普陀区兰溪路164号

专利代理机构:上海信好专利代理事务所(普通合伙) 31249

代理人:张静洁%贾慧琴

国别省市代码:上海;31

权利要求：

一种利用双荧光素酶报告基因筛选血管生成相关microRNA的方法，其特征在于，所述的方法包含：步骤1，进行目标细胞的培养和铺板；步骤2，配置microRNA/DNA/脂质体的混合物，对步骤1所述的细胞进行共转染；步骤3，进行荧光素酶活性检测；该步骤三包含：将步骤2所得的共转染后的细胞，用一种含有VEGFA基因3′UTR与报告基因的重组质粒，以及一种海肾荧光素酶载体分别进行转染；然后将得到的细胞经过培养后，进行收集；将所收集的细胞进行裂解；取15?20?μl细胞裂解液于离心管中，加入工作液，然后用发光仪进行测读。