一种Vc二步发酵菌株的筛选方法

摘要：

本发明涉及菌株筛选方法，具体的说是一种Vc二步发酵菌株的筛选方法。将Vc二步发酵中的转化菌和伴生菌混合培养于Vc二步发酵的种子液中，发酵液经离心后，上清液为转化菌溶液A；另将Vc二步发酵中的伴生菌接种于培养基中培养20-28小时，培养后无菌滤膜过滤滤液为发酵液B；将转化菌溶液A与发酵液B混匀后进行稀释，取稀释液涂布于分离培养基上，在29-37℃培养4-8天后，形成转化菌的菌落；再在形成转化菌的菌落的分离培养基上加入0.1％浓度的无菌溴百里香酚兰指示液，于常温下静置0.5～2小时，根据菌落周围的黄色圈大小判断转化效率高低，从而快速筛选出具高效转化能力的转化菌株。本发明筛选方法既避免了伴生菌的存在对转化作用的影响，又保证了伴生液对转化菌生长和产酸的激活作用，而指示剂颜色的变化又能准确指示转化菌的转化能力，同时极大地提高了筛选效率。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201210453520.9

申请日期：2012-11-13

公开/公告号：CN102978131A

公开/公告日：2013-03-20

主分类号：C12N1/20(2006.01)I

申请/专利权人:中国科学院沈阳应用生态研究所

发明/设计人:徐慧;杨伟超;韩利涛;姜铭妍;徐静;张忠泽

主申请人地址:110164 辽宁省沈阳市沈北新区蒲河新城裕农路72号

专利代理机构:沈阳科苑专利商标代理有限公司 21002

代理人:周秀梅%李颖

国别省市代码:辽宁;21

权利要求：

一种Vc二步发酵菌株的筛选方法，其特征在于：将Vc二步发酵中的转化菌和伴生菌混合培养于Vc二步发酵的种子液中，发酵液经离心后，所获上清液为转化菌溶液A；另将Vc二步发酵中的伴生菌接种于培养基中培养20‑28小时，培养后经无菌滤膜过滤滤液为发酵液B；将转化菌溶液A与发酵液B按2：1～8：1（v/v）混匀,而后进行稀释，取稀释液涂布于分离培养基上，在29‑37℃培养4‑8天后，形成转化菌的菌落；再在形成转化菌的菌落的分离培养基上加入0.1％浓度的无菌溴百里香酚兰指示液，于常温下静置0.5～2小时，根据菌落周围的黄色圈大小判断转化效率高低，从而快速筛选出具高效转化能力的转化菌株。