一种八宝景天基因组DNA的提取方法

摘要：

本发明公开了一种八宝景天基因组DNA的提取方法，包括：取粉末状八宝景天，加入预热的2％CTAB提取液溶解；在65℃下温浴45min，再加入等体积的氯仿-异戊醇混合液混合后，常温下高速离心，重复两次；然后取上清加入2/3体积的冰冷异丙醇混合后，低温条件下放置15-30min沉淀DNA；低温下高速离心，弃上清液，回收沉淀，用70％乙醇洗涤2次，风干后加入TE缓冲液，然后加入RNase于37℃消化30min，得到的DNA样品置于低温下保存。本发明的提取方法中加入RNase酶能够有效充分地去除RNA，从而使得提取的DNA纯度更高，也能避免RNA对后续实验的干扰。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201210438729.8

申请日期：2012-11-07

公开/公告号：CN102876665A

公开/公告日：2013-01-16

主分类号：C12N15/10(2006.01)I

申请/专利权人:天津市农业生物技术研究中心

发明/设计人:周祥明;宋建;王姝

主申请人地址:300384 天津市西青区津静公路17公里处

专利代理机构:天津市杰盈专利代理有限公司 12207

代理人:朱红星

国别省市代码:天津;12

权利要求：

?一种八宝景天基因组DNA的提取方法，其特征在于按以下的步骤进行：(1)取0.2g新鲜叶片放入研钵中，加入0.02g?0.04g石英砂，用液氮充分研磨成粉末，加入预热的0.5mL?2％CTAB提取液溶解；所述的2％CTAB提取液是由下述原料组成：2％CTAB????????????????????2g/100mL2%SDS?????????????????????2g/100mL2%PVP?????????????????????2g/100mLpH值为8.0的0.1mol/LTris?Cl??1.1214g/100mL20mmol/LEDTA??????????????0.744g/100mL1.4mol/LNaCl????????????????8.19g/100mL10％的β?巯基乙醇???????????10ml/100mL；?(2)在55℃～65℃下温浴45min，取出冷却后再加入0.5?1mL氯仿?异戊醇混合液，常温下12000?15000转/分，离心10?15分钟；其中氯仿与异戊醇的体积比为24∶1；?(3)取上清液转入新离心管，再加入等体积的氯仿?异戊醇混合液，常温下12000?15000转/分，离心10?15分钟；?(4)取上清液再转入新离心管，并加入上清液2/3体积的冰冷异丙醇混合，?20℃条件下放置15?30min沉淀DNA；(5)8?10℃，12000?15000转/分，离心10?15分钟，弃上清液，回收沉淀，用70％乙醇洗涤2次，风干后加入pH值为8.0的TE缓冲液80?100μl；然后加入5?8μL?RNase，37℃保温1?1.5小时，置于?20℃条件下保存；所述的TE缓冲液包括：10mmol/L?pH=8.0的Tris?Cl和1mmol/L的EDTA。