一种从罗非鱼血液中提纯超氧化物歧化酶的方法
本发明公开了一种从罗非鱼血液中提纯超氧化物歧化酶(SOD)的方法,包括以下步骤:将收集到的洁净罗非鱼血红细胞用双蒸水稀释后,经超声波辅助细胞破膜处理;依次加入无水乙醇和氯仿沉淀杂蛋白,离心,收集上清液,并用氮吹仪去除有机溶剂;将收集到的上清液在60℃条件下加热处理,离心,收集上清液;采用多功能蛋白快速纯化液相色谱系统控制,将经上述步骤得到的SOD液用阴离子交换进行纯化,得到的高纯度SOD液。本发明提纯方法耗时短,操作单元精简,适合于工业化生产;能较好地解决罗非鱼血排放造成的环境污染问题,并能够显著地增加企业的附加值。
发明专利
CN201210434096.3
2012-11-02
CN102888386A
2013-01-23
C12N9/02(2006.01)I
中国水产科学研究院南海水产研究所
李来好;岑剑伟;杨贤庆;郝淑贤;刘在军;吴燕燕;黄卉;魏涯;林婉玲;邓建朝;周婉君;石红
510300 广东省广州市海珠区新港西路231号
广州知友专利商标代理有限公司 44104
宣国华
广东;44
一种从罗非鱼血液中提纯超氧化物歧化酶的方法,其特征在于包括以下步骤:a.红细胞破碎:将收集到的洁净罗非鱼血红细胞用1~2倍体积的双蒸水稀释后,在超声功率300~400W条件下作用15~20min进行红细胞破碎处理,然后5000×g离心15min,收集上层红细胞液;b.乙醇、氯仿沉淀:先后加入无水乙醇和氯仿到红细胞液中,边加边搅拌,搅拌20min后,静置30min,然后10000×g离心15min,收集上清液;再用氮吹仪处理去除乙醇和氯仿;c.热变性处理:将步骤b所得上清液在60℃条件下恒温水浴15~20min,冷却后10000×g离心15min,收集上清液;d.阴离子交换:将步骤c所得上清液在多功能蛋白快速纯化液相色谱系统辅助下,采用阴离子交换法,制得SOD液。