一种3’-cDNA展示方法

摘要：

本发明公开了一种3’-cDNA展示方法，步骤为：(1)以总RNA(或者mRNA)为模板，以设计合成的Oligo (dT)18V引物通过反转录合成cDNA双链；(2)将步骤(1)得到产物通过TaqⅠ内切酶进行酶切；(3)将步骤(2)产物与设计合成的“Y”形接头用T4连接酶连接；(4)以Oligo (dT)18V及TaqⅠ“Y”形接头序列设计引物进行PCR扩增。(5)变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。本发明应用“Y”形接头与酶切片段连接，抑制非PolyA末端的cDNA扩增，让具有“Y”形接头及PolyA末端的cDNA得到指数扩增，排除了非PolyA末端cDNA的干扰，从而只扩增cDNA 3’末端序列，具有经济性好、效率高、可靠性强、冗余度低及假阳性低等优点，能够同时研究多个样本多个时期的生物体mRNA时空特异表达情况，是发掘基因的功能、探索生物发育机制等的有力工具。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201210382040.8

申请日期：2012-10-10

公开/公告号：CN102994632A

公开/公告日：2013-03-27

主分类号：C12Q1/68(2006.01)I

申请/专利权人:四川省农业科学院土壤肥料研究所

发明/设计人:贾定洪;郑林用;彭卫红;甘炳成;黄忠乾;谭伟;王波;谢丽源

主申请人地址:610066 四川省成都市外东狮子山路4号二区

专利代理机构:北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246

代理人:龚燮英

国别省市代码:四川;51

权利要求：

一种3’‑cDNA展示方法，其特征在于，该方法的主要步骤包括：(1)以总RNA 或者mRNA 为模板，以设计合成的Oligo (dT)18V引物通过反转录合成cDNA双链；(2)将步骤(1)得到产物通过TaqⅠ内切酶进行酶切；(3)将步骤(2)产物与设计合成的“Y”形接头用T4连接酶连接；(4)以Oligo (dT)18V及TaqⅠ“Y”形接头序列设计引物进行PCR扩增；(5)变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。