一种人类粪便DNA提取方法
本发明公开了一种人类粪便DNA提取方法。现有技术很繁琐而且耗时，且过去采样的方法抽提出的痕量DNA由于含量太少，很难用来进行分子诊断。本发明对粪便样品采用选择性样品采集PSC，采用低温保存法，然后用灭菌枪头或灭菌刀片挑取样本，直接置于冰上；首先加入粪便裂解液，充分裂解混匀后加入牛血清白蛋白，离心去上清液加入蛋白酶K置于58℃条件下消化反应，然后加入蛋白沉淀液沉淀蛋白，离心取上清液加入硅胶膜结合液充分结合DNA，离心取沉淀物加入硅胶膜洗涤液洗涤两次，离心后加入TE缓冲液，最后得到含DNA的保存液。本发明具有较高的重复稳定性、较简单且不耗时的优点。
发明专利
CN201210320895.8
2012-09-03
CN102864138A
2013-01-09
C12N15/10(2006.01)I
浙江世纪康大医疗科技有限公司
秦炜;毕婷婷;阮丽娟;陈标榜;余向东
311215 浙江省杭州市萧山区建设四路99号
杭州求是专利事务所有限公司 33200
杜军
浙江;33
?一种人类粪便DNA提取方法，其特征在于该方法包括以下步骤：步骤一.粪便样品的采集：采集人排出的暴露不超过24小时的粪便样品，采用选择性样品采集，用无菌刀片刮下粪便样品的表层黏膜，分装到2ml离心管中；步骤二.粪便样品的保存：采用低温保存法，采集来的粪便样品，立即放于?20℃～?80℃保存；步骤三.粪便样品的取样：对于所保存的粪便样品，拿出置于冰上，用灭菌枪头或灭菌刀片挑取180～200mg的样本，置于冰上；步骤四.样本的DNA提取：(1).细胞裂解分离在样本中加入1.2～1.6ml的粪便裂解液，置于常温条件下充分裂解混匀后离心分离，取上清液，加入200～300?mg牛血清白蛋白BSA去除杂质，离心分离得到上清液，在该上清液中加入20～40μl的浓度为20mg/ml的蛋白酶K置于58℃条件下消化反应1～6h，得到消化液；所述的粪便裂解液由50mmol/L?Tris?Cl、5mmol/L?EDTA、1mmol/L?NaCl和重量体积比为0.1%十二烷基硫酸钠SDS配制而成；(2).沉淀将上述步骤(1)所得的消化液冰浴冷却至常温，再加入200～400μl蛋白沉淀液沉淀蛋白，充分混匀后经离心分离去除蛋白杂质，得到离心后的上清液，该上清液为DNA抽提液；(3).纯化向已经去除蛋白杂质的DNA抽提液中加入硅胶膜结合液，DNA抽提液与硅胶膜结合液的体积比为1:1.5～1:2.5，然后经硅胶膜吸附，离心分离，得到沉淀物，在沉淀物中加入700～800μl硅胶膜洗涤液洗涤，重复洗涤两次，然后离心分离脱去硅胶膜中残存的硅胶膜洗涤液后，加入50～100μl?TE缓冲液溶解洗脱DNA，离心分离得到离心后的上清液，该上清液为含DNA的保存液。