ZNF545基因甲基化定量检测方法
本发明公开了一种ZNF545基因甲基化的定量检测方法，将第一荧光标记物引入到上游引物或下游引物中，将第二荧光标记物引入到dCTP底物中，在PCR扩增过程中同时将两种荧光标记物标记到待测样品中ZNF545基因序列中，在建立荧光强度标准化曲线后，可根据两种荧光标记物的信号强度比值来定量检测待测样品中ZNF545基因的甲基化程度。本发明的甲基化定量检测的方法不受甲基化位点的影响，快速，准确的对基因甲基化进行定量；灵敏度较高，只需要微量的DNA样品就可进行检测；无需设计特异性探针或特异性引物，方法简便易行，所采用的技术简单易于实现，成本低。
发明专利
CN201210284720.6
2012-08-10
CN103031372A
2013-04-10
C12Q1/68(2006.01)I
深圳先进技术研究院
蔡林涛;王朝晖;龚萍;苏献伟;石碧华
518055 广东省深圳市南山区西丽大学城学苑大道1068号
广东;44
一种ZNF545基因甲基化定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、建立ZNF545基因甲基化的标准化曲线：对ZNF545基因分别建立甲基化程度为100％的阳性质控品与甲基化程度为0％的阴性质控品，将阳性与阴性质控品按照质量比为0∶1、1∶3、1∶1、3∶1、1∶0混合，得到一组标准品，标准品的甲基化程度分别为0％、25％、50％、75％、100％；用第一荧光标记物标记ZNF545基因的上游引物或下游引物，用第二荧光标记物标记dCTP；以dTTP、dGTP、dATP和标记有第二荧光标记物的dCTP作为底物，以标记有第一荧光标记物的引物对标准品进行PCR扩增，检测所述标准品PCR扩增的产物中的第一荧光标记物和第二荧光标记物的荧光强度；其中，第一荧光标记物的荧光强度为M，第二荧光标记物的荧光强度为N；以N/M为纵坐标，标准品的甲基化程度为横坐标，得到ZNF545基因甲基化的标准曲线方程；步骤二：待测样品ZNF545基因甲基化定量检测：抽提待测样本的血液基因组DNA，对基因组DNA进行亚硫酸氢盐转化处理；用第一荧光标记物标记ZNF545基因的上游引物或下游引物，用第二荧光标记物标记dCTP，以dTTP、dGTP、dATP和标记有第二荧光标记物的dCTP作为底物，以标记有第一荧光标记物的引物对亚硫酸氢盐处理后的待测样本基因组DNA进行PCR扩增，检测PCR扩增后的产物中的第一荧光标记物和第二荧光标记物的信号强度，第一荧光标记物的信号强度为M1，第二荧光标记物的信号强度为N1；步骤三、将N1/M1代入步骤一的标准曲线方程，计算得出对应横坐标的值，即为待测样本中ZNF545基因甲基化程度。