一种产毒微囊藻特异性多重PCR检测方法及其试剂盒

摘要：

本发明所要解决的技术问题在于，为了克服现有技术中存在的对产毒微囊藻检测方法复杂、仪器要求高等问题，提供一种产毒微囊藻特异性多重PCR检测方法及其试剂盒。一种产毒微囊藻特异性多重PCR检测方法，包括如下步骤：(1)从检测地取样微囊藻，并提取基因组DNA；(2)设计合成微囊藻，包括产毒和非产毒株的ropC1基因和产毒微囊藻mcyA、mcyB、mcyD、mcyE、mcyI、mcyJ基因片段的7对引物；(3)使用上述设计的特异性引物分别进行PCR扩增反应，最后进行电泳凝胶检测。本发明以多个基因作为分子指标，提高了检测精度，操作简便，易于掌握，可快速检测出水体中的微囊藻，并能有效识别是否为产毒株。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201210031789.8

申请日期：2012-02-13

公开/公告号：CN102952876A

公开/公告日：2013-03-06

主分类号：C12Q1/68(2006.01)I

申请/专利权人:上海海洋大学

发明/设计人:唐晨;董丽;饶涛;何培民;贾睿

主申请人地址:201306 上海市浦东新区临港新城沪城环路999号

专利代理机构:上海三和万国知识产权代理事务所 31230

代理人:陈伟勇

国别省市代码:上海;31

权利要求：

一种产毒微囊藻特异性多重PCR检测方法，包括如下步骤：(1).从检测地取样微囊藻，并提取基因组DNA，(2).设计并合成微囊藻包括产毒和非产毒株的ropC1基因和产毒微囊藻mcyA、mcyB、mcyD、mcyE、mcyI、mcyJ基因片段的7对引物：引物       序列(5’→3’)rpoC1 TCF1  CAGTTATCTCAGTATCCTGCTCG，rpoC1 TCR1  ACTTCATCCAAGACGTGCC；mcyA TCF1   GCATCGGAGACAGAAACAGG，mcyA TCR1   AAGTTACCCAAACCGAAAGG；mcyB TCF1   CCAAACTGGTGCCGAATC，mcyB TCR1   CAAGATGACAAAGGCAGAAGG；mcyD TCF1   GCCATTTAGAAGGTGCTGC，mcyD TCR1   GGCTGAGTGATTTGGGTTTC；mcyE TCF1   CAAACTGCTCCAGGTATCATTG，mcyE TCR1   TGAGTCTGGGAGATTAAAGTCG；mcyI TCF1   TTGGTACTCTGGTGGCTCAC，mcyI TCR1   CTCCTCCTGAAGCACTTGTAAT；mcyJ TCF1   TGACCGCTTTAGAATGTGCT，mcyJ TCR1   ACTAATTCCTTGGCTAATCTGG。(3).使用上述设计的特异性引物分别进行PCR扩增反应，最后进行电泳凝胶检测。