一种分析基因表达定量的方法

摘要：

本发明公开了一种分析基因表达定量的方法，所述方法包括：从总RNA中纯化mRNA，制备片段化mRNA；将所述片段化mRNA逆转录制备得到cDNA，将所述cDNA纯化后制备为平末端DNA，纯化所述平末端DNA；将所述平末端DNA片段制备得到末端加“A”碱基的DNA片段；在所述末端加“A”碱基的DNA片段两端加接头序列，得到两端加接头序列的DNA片段并进行纯化，对所述两端加接头序列的DNA片段进行PCR反应，纯化PCR反应产物；对所述PCR反应产物测序；将所述测序得到的数据过滤不合格序列得到干净序列，利用短序列映射程序将所述干净序列与参考序列比对，对所述比对结果进行分析。本发明有效的实现了定量准、可重复性高、费用低、检测阈值宽、信号噪音小等优点。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201110283718.2

申请日期：2011-09-22

公开/公告号：CN103014137A

公开/公告日：2013-04-03

主分类号：C12Q1/68(2006.01)I

申请/专利权人:深圳华大基因科技有限公司%深圳华大基因研究院

发明/设计人:章文蔚;张艳艳;龚梅花;彭智宇;韩祖晶;高欢;汪建;王俊;杨焕明;张秀清

主申请人地址:518083 广东省深圳市盐田区北山路146号北山工业区综合楼11F-3

国别省市代码:广东;44

权利要求：

一种分析基因表达定量的方法，其特征在于，包括：（1）从总RNA中纯化mRNA，制备片段化mRNA；（2）将所述片段化mRNA逆转录制备得到cDNA，将所述cDNA纯化后制备为平末端DNA，纯化所述平末端DNA；（3）将所述平末端DNA片段制备得到末端加“A”碱基的DNA片段；（4）在所述末端加“A”碱基的DNA片段两端加接头序列，得到两端加接头序列的DNA片段并进行纯化，对所述两端加接头序列的DNA片段进行PCR反应，纯化PCR反应产物；（5）对所述PCR反应产物测序；（6）将所述测序得到的数据过滤不合格序列得到干净序列，利用短序列映射程序将所述干净序列与参考序列比对，对所述比对结果进行分析。