一种体外诱导胚胎干细胞分化成为神经细胞方法

摘要：

本发明属于生物医学领域，涉及一种体外诱导胚胎干细胞分化成为神经细胞方法，尤其涉及嘌呤衍生物Purmorphamine诱导Olig2+-GFP+-mES的神经细胞分化的方法及其用途。本发明采用拟胚体介导的神经诱导法，以Olig2-GFP+-mES作为细胞模型，以嘌呤衍生物Purmorphamine结合全反式维甲酸定向诱导所述的Olig2-GFP+-mES细胞分化为脊髓运动神经元和少突胶质前体细胞；经实验证实，所述的Purmorphamine可作为SHH的替代物，有效地诱导Olig2+-GFP+-mES分化为高纯度、有功能的脊髓运动神经元和少突胶质细胞，并引起相关基因表达改变；移植实验结果证实，所诱导的神经细胞能促进大鼠脊髓损伤后功能和形态的部分恢复，具有促进脊髓损伤后再生和功能重建的作用。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201110217426.9

申请日期：2011-07-29

公开/公告号：CN102899285A

公开/公告日：2013-01-30

主分类号：C12N5/0735(2010.01)I

申请/专利权人:复旦大学

发明/设计人:孙燕;彭裕文;张素春;李瑞锡

主申请人地址:200433 上海市邯郸路220号

专利代理机构:上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙) 31268

代理人:吴桂琴

国别省市代码:上海;31

权利要求：

一种体外诱导胚胎干细胞分化成为神经细胞方法，其特征在于，采用拟胚体介导的神经诱导法，以Olig2?GFP+?mES作为细胞模型，以嘌呤衍生物Purmorphamine结合全反式维甲酸定向诱导所述的Olig2?GFP+?mES细胞分化为脊髓运动神经元和少突胶质前体细胞；包括下述步骤：①将Olig2+?GFP+?mES放入含有白血病抑制因子LIF的胚胎干细胞培养基悬浮培养2天；②放入含有全反式维甲酸RA和嘌呤衍生物Purmorphaine的神经分化培养基中培养4天；③放入含有bFGF的神经分化培养基分别培养2天和6天，采用荧光激活的细胞筛选Olig2+?GFP+?阳性细胞；④分别在神经元培养基和少突胶质细胞培养基继续培养，诱导生成脊髓运动神经元和少突胶质细胞。