一种制备L-叔亮氨酸的方法

摘要：

本发明公开了一种以亮氨酸脱氢酶为生物催化剂制备单一光学纯L-叔亮氨酸的工艺方法，具体包括以下步骤：在反应液中加入底物三甲基丙酮酸、甲酸铵、亮氨酸脱氢酶和由甲酸脱氢酶介导的辅酶循环再生体系，振荡或搅动，反应后加热反应体系，过滤或离心除去变性蛋白，除去溶剂，过滤后，得到L-叔亮氨酸产物和含有少量L-叔亮氨酸的滤液，滤液循环用于下一轮反应，反应温度为15~50℃。本发明利用亮氨酸脱氢酶，配合辅酶循环再生体系，采用循环工艺制备L-叔亮氨酸，底物浓度高达2.0M，所需的辅酶NAD+或NADH浓度较低，并且可循环多次使用而达到忽略辅酶成本的水平，具有重要应用价值。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN201110202325.4

申请日期：2011-07-19

公开/公告号：CN102888431A

公开/公告日：2013-01-23

主分类号：C12P13/04(2006.01)I

申请/专利权人:陈依军

发明/设计人:陈依军;江金鹏;吴旭日

主申请人地址:215002 江苏省苏州市养育巷瓣莲巷42号4幢104室

专利代理机构:苏州创元专利商标事务所有限公司 32103

代理人:陶海锋

国别省市代码:江苏;32

权利要求：

一种制备L?叔亮氨酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)?向反应液中加入底物三甲基丙酮酸、共底物甲酸铵、亮氨酸脱氢酶以及由甲酸脱氢酶介导的辅酶循环再生体系，配制得到反应体系；所述反应液为水或pH7.0~10.0的缓冲液；底物浓度为1.0M~2.0M；所述共底物甲酸铵和底物三甲基丙酮酸的摩尔比为1∶1~10∶1；所述亮氨酸脱氢酶的浓度大于或等于2U/mL，亮氨酸脱氢酶与甲酸脱氢酶摩尔比为1∶1~1∶5；所述由甲酸脱氢酶介导的辅酶循环再生体系中NAD+或NADH的浓度大于或等于0.01mM；(2)步骤(1)所得反应体系在振荡或搅拌条件下，调节反应体系pH至7.0~10.0，于15~50?℃下，反应制备L?叔亮氨酸。