1-O-乙酰大花旋覆花内酯提取物的制备方法
本发明提供一种以旋覆花不同组织培养物为生物合成载体对药用活性成分1-O-乙酰大花旋覆花内酯(1-O-Acetyl??britanni??lactone，ABL)进行提取及制备的方法。它包括如下步骤：A、旋覆花无菌苗的培养；B、悬浮细胞、愈伤组织、毛状根或黄化苗的培养；C、旋覆花组织培养物中ABL的提取。悬浮细胞、愈伤组织、毛状根或黄化苗等组织培养物还可利用植物生物反应器进行大规模培养，用于ABL的提取。
发明专利
CN201010101557.6
2010-01-27
CN101787380A
2010-07-28
C12P17/04(2006.01)I
河北医科大学
于树宏;李倩;查建蓬;詹文红
050017 河北省石家庄市中山东路361号
河北;13
一种1-O-乙酰大花旋覆花内酯提取物的制备方法，包括如下步骤：A、旋覆花无菌苗的培养：取旋覆花种子，消毒后培养获得无菌幼苗；B、悬浮细胞、愈伤组织、毛状根或黄化苗的获得：①愈伤组织的获得：切取步骤A中培养的旋覆花无菌苗任一外植体材料，划伤表面以形成伤口，接入MS+0.05-0.15mg/L??CPPU+0.5-1.5mg/L6-BA+0.2-1.0mg/LNAA培养基，黑暗或弱光条件下诱导愈伤组织的形成；②悬浮细胞的获得：将①中获得的疏松、生长迅速的淡黄色愈伤组织团块培养于MS+0.05-0.15mg/L??CPPU+0.5-1.5mg/L??NAA固体培养基中，连续继代3～5次；将生长旺盛、质地疏松的颗粒状白色愈伤组织，继代于液体培养基MS+0.05-0.15mg/L??CPPU+0.5-1.5mg/L??NAA中，得到悬浮细胞系；培养温度：23～27℃，摇床转速：120～140r·min-1，黑暗或弱光培养；③毛状根的获得：切取步骤A中培养的旋覆花无菌苗任一外植体材料，划伤表面造成伤口，置于已活化好的发根农杆菌菌液中浸泡5sec～15min，取出吸干表面菌液，接入MS培养基中，温度23～27℃，黑暗培养；④黄化苗的获得：切取步骤A中培养的旋覆花无菌苗的自然根2～5cm，置于MS培养基中，5～10天后自然根上直接分化出黄化苗，将其分离并继代于MS培养基中，黑暗培养；C、1-O-乙酰大花旋覆花内酯的提取：将获得的悬浮细胞、愈伤组织、毛状根、黄化苗、无菌苗或无菌苗自然根中的一种或几种的混合物，用于提取1-O-乙酰大花旋覆花内酯。