1,3-丙二醇氧化还原酶辅酶特异性改造及其应用
1，3-丙二醇氧化还原酶辅酶特异性改造及其应用，属于生物工程技术领域。其特征是通过理性设计改造1，3-丙二醇氧化还原酶辅酶特异性获得突变酶，通过构建含有上述突变酶基因序列的重组表达载体，并将该重组表达载体转化宿主细胞，获得重组菌株，以及该重组菌株在制备1，3-丙二醇中的应用。本发明的效果和益处是同原始菌株相比，利用本发明提供的重组菌株进行发酵，1，3-丙二醇的产量提高10～50％。
发明专利
CN200810228269.X
2008-10-22
CN101643739
2010-02-10
C12N15/53(2006.01)I
大连理工大学
修志龙;马成伟;张 乐;戴建英
116024辽宁省大连市甘井子区凌工路2号
大连理工大学专利中心
侯明远
辽宁;21
1.一种1，3-丙二醇氧化还原酶辅酶特异性改造及其应用，其特征在于如下步骤：第一步：所述1，3-丙二醇氧化还原酶基因来自克雷伯氏菌属、柠檬酸菌属或梭菌属，所使用的1，3-丙二醇氧化还原酶基因具有SEQ ID NO：1的序列，或者是SEQ ID NO：1的简并性序列，或者是所编码的序列因取代、缺失、插入和/或添加一个或几个氨基酸残基而与SEQ ID NO：1所编码序列有所不同，但仍具有相同酶活性的酶的核苷酸序列；所使用的1，3-丙二醇氧化还原酶突变酶具有SEQ ID NO：2的序列，或者因取代、缺失、插入和/或添加一个或几个氨基酸残基而与SEQ ID NO：2的序列有所不同，但仍具有相同酶活性的酶的氨基酸酸序列；所使用的1，3-丙二醇氧化还原酶突变酶基因具有SEQ ID NO：3的序列，或者是SEQ ID NO：3的简并性序列，或者是所编码的序列因取代、缺失、插入和/或添加一个或几个氨基酸残基而与SEQ ID NO：3所编码序列有所不同，但仍具有相同酶活性的酶的核苷酸序列；第二步：所述启动子是组成型启动子或者可诱导型启动子，组成型启动子选自蛋白激酶启动子、固氮启动子或二羟丙酮启动子，可诱导型启动子选自乳糖启动子、噬菌体启动子、乳糖和色氨酸的杂合启动子或色氨酸启动子；所述重组载体的载体骨架选自pBR322、pUC 18、pET系列或pDK系列载体；第三步：所述宿主细胞选自克雷伯氏菌属、柠檬酸菌属或梭菌属；第四步：发酵方式采用批式发酵、批式流加发酵或连续发酵；种子及发酵培养基中含有碳源、氮源、无机盐和维生素；发酵是在微生物培养过程中通入空气进行的有氧发酵、微氧发酵或者在微生物培养过程中通入氮气进行的厌氧发酵；发酵接种量1～12％，培养温度20～50℃，发酵时通气量为0.1～1.0vvm，调节pH维持在5.0～9.0，搅拌转速为80～350rpm。