2型糖尿病疫苗的构建和制备方法
本发明提供一种2型糖尿病疫苗的构建和制备方法,将添加起始密码子ATG的人RBP-4活性蛋白编码基因插入T7噬菌体DNA衣壳蛋白10B编码基因的3’端,使人RBP-4蛋白与T7 10B表达成融合蛋白,构建成为重组噬菌体RBP/T7,并进一步制备成重组噬菌体疫苗,免疫机体,刺激产生针对RBP-4的特异性抗体,调节体内的RBP-4水平,从而达到控制血糖的目的。经试验,构建的重组噬菌体疫能够有效降低KKAy小鼠血糖、甘油三酯和胆固醇,并能有效地保护KKAy小鼠,避免了其血糖水平的升高,同时增强了KKAy小鼠对葡萄糖灌胃和胰岛素注射的耐受性。因此用它治疗2型糖尿病,可彻底改变传统药物治疗存在的诸多不足或问题。
发明专利
CN200810058641.7
2008-07-04
CN101307314
2008-11-19
C12N15/12(2006.01)I
中国医学科学院医学生物学研究所
胡云章;胡凝珠;兰 芸;王海漩;段金梅
650118云南省昆明市五华区茭菱路379号
昆明正原专利代理有限责任公司
徐玲菊
云南;53
1、一种2型糖尿病疫苗的构建方法,其特征在于经过下列步骤:(1)在蛋白编码序列如下的人视黄醇结合蛋白-4的编码序列前添加启动密码子ATG:GAACGTGATTGCCGTGTGAGCAGCTTTCGTGTGAAAGAAAACTTTGATAAAGCGCGTTTTAGCGGCACCTGGTATGCGATGGCGAAAAAAGATCCGGAAGGCCTGTTTCTGCAGGATAACATTGTGGCGGAATTTAGCGTGGATGAAACCGGCCAGATGAGCGCGACCGCGAAAGGCCGTGTGCGTCTGCTGAACAACTGGGATGTGTGCGCGGATATGGTGGGCACCTTTACCGATACCGAAGATCCGGCGAAATTTAAAATGAAATATTGGGGCGTGGCGAGCTTTCTGCAGAAAGGCAACGATGATCATTGGATTGTGGATACCGATTATGATACCTATGCGGTGCAGTATAGCTGCCGTCTGCTGAACCTGGATGGCACCTGCGCGGATAGCTATAGCTTTGTGTTTAGCCGTGATCCGAACGGCCTGCCGCCGGAAGCGCAGAAAATTGTGCGTCAGCGTCAGGAAGAACTGTGCCTGGCGCGTCAGTATCGTCTGATTGTGCATAACGGCTATTGCGATGGCCGTAGCGAACGTAACCTGCTG;(2)将添加起始密码子ATG的人RBP-4蛋白基因片段的5’端引入EcoRI的酶切位点GAATTC,3’端引入HindIII酶切位点AAGCTT,合成插入pGEM-T载体,构建重组质粒RBP/T;(3)将合成构建得到的质粒RBP/T转化大肠杆菌TOP10F’感受态细胞,克隆扩增,大量提取质粒RBP/T;(4)从质粒RBP/T上用EcoRI和HindIII双酶切下目的片段,插入T7 Select 10-3b多克隆位点的EcoR I和HindIII之间,使其正好位于T7 10B基因的3’端,使人RBP-4蛋白与T7 10B表达成融合蛋白,构建成为重组噬菌体RBP/T7。