pET15b-PEP-1-SOD1质粒及构建、PEP-1-SOD1融合蛋白及表达

摘要：

本发明提出了pET15b-PEP-1-SOD1质粒及构建、PEP-1-SOD1融合蛋白及表达。具体如下：合成两端分别加有Xho I和BamH I酶切位点的上下游引物，用PCR方法以pBluescript II SK-SOD1质粒为模板，以上下游引物进行PCR扩增；将扩增的SOD1 cDNA与dATP反应加“A”，纯化后与pGEM-T Easy载体连接；将pGEM-T Easy-SOD1质粒和pET15b质粒分别用Xho I和BamH I双酶切，回收SOD1片段和线性化的pET15b片段并纯化，两者在T4 DNA连接酶作用下发生连接得pET15b-SOD1质粒；把pET15b-SOD1用NdeI、Xho I双酶切，回收线性化的pET15b-SOD1片段，将编码PEP-1的两条寡核苷酸链复性为双链，然后与Nde I、Xho I双酶切消化、纯化回收后的pET15b-SOD1得pET15b-PEP-1-SOD1质粒。融合蛋白的表达如下：用pET15b-PEP-1-SOD1转化感受态E.coliBL21(DE3)，然后在培养基中发酵；用冰浴超声破菌，收集上清液，纯化融合蛋白，脱盐、除菌后，用Eppendorf管分装，-80℃保存。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200710051299.3

申请日期：2007-01-16

公开/公告号：CN101008013

公开/公告日：2007-08-01

主分类号：C12N15/63(2006.01)I

申请/专利权人:王家宁

发明/设计人:王家宁

主申请人地址:442000湖北省十堰市朝阳中路23号十堰市人民医院临床医学研究所

专利代理机构:十堰博迪专利事务所

代理人:张秀英

国别省市代码:湖北;42

权利要求：

1、pET15b-PEP-1-SOD1质粒，采用pET15b为表达载体，PEP-1-SOD1基因见序列表1中的核苷酸序列。