γ-聚谷氨酸的制备工艺
本发明涉及微生物技术领域，具体的说是一种γ-聚谷氨酸的制备工艺，其工艺步骤为(1)获取高产菌种工艺：菌种获取及分离、菌落的挑选与纯化、高产菌的筛选、菌种鉴定；(2)发酵工艺；(3)分离工艺；(4)纯化工艺。本发明与现有技术相比，采用了固体发酵降低了生产成本，且使用该工艺发酵时间短、提高了γ-PGA的产量、能耗少、操作简便。
发明专利
CN200710038317.4
2007-03-22
CN101037701
2007-09-19
C12P1/00(2006.01)I
华东师范大学
胡荣章;吴自荣;黄 静;王隆华;叶海峰;汪 洋;马骁骏
200062上海市中山北路3663号
上海三方专利事务所
吴干权
上海;31
1、一种γ-聚谷氨酸的制备工艺，其特征在于其工艺步骤为：(1)获取高产菌种工艺：a.菌种获取及分离：将LB琼脂培养基熔化，制成LB琼脂平板备用；用豆豉或纳豆制取三种不同浓度的菌悬液，再吸取不同浓度的菌悬液分别滴加到三个备用的LB琼脂平板上，在恒温培养箱中37℃恒温培养48h，获得菌种；b.菌落的挑选与纯化：在上述LB平板上随机挑取单菌落，并在LB平板上划线纯化，获得纯种；c.高产菌的筛选：将上述纯化的菌种各一环，接入到活化培养基内37℃培养过夜作为活化菌种；再将活化菌种分别接至三种不同的筛选培养基A、筛选培养基B、筛选培养基C内，以37℃，220rpm培养48小时，再用蒸馏水分别稀释后离心去菌体，取上清液加入冰无水乙醇中，并搅拌得沉淀，干燥后得γ-PGA粗品A，称重，比较γ-PGA粗品A的产量，筛选出一株高产菌株；d.菌种鉴定：对高产菌株采用一般细菌常用鉴定方法进行菌种鉴定，根据个体形态特征、群体形态特征及生理生化特征鉴定出此高产菌株为枯草芽孢杆菌；(2)发酵工艺：将干大豆洗净后，用蒸馏水浸泡6～10h后装入发酵瓶中，115℃-121℃，蒸汽灭菌30min；然后挑取上述制得的枯草芽孢杆菌菌种一环，接入液体活化培养基内，以37℃，220rpm摇床培养过夜作活化菌种，然后再接此活化菌种放入至少一种以上的不同组份的发酵培养基内，30～40℃，平放培养24～48h；(3)分离工艺：向发酵瓶中加入两倍体积pH值为3.0～4.0的蒸馏水拌洗，纱布过滤，收集滤液A，所得豆渣再加等体积pH值为3.0～4.0蒸馏水拌洗，纱布过滤，收集滤液B；合并滤液A和滤液B，调pH值至3.0～3.5，9000r/min，20min，吸取上清液，在上清液中加两倍体积95％乙醇搅拌，得沉淀，沉淀用乙醇脱水，脱色后得γ-PGA粗品；(4)纯化工艺：用蒸馏水溶解所得γ-PGA粗品，使浓度为0.9-1.2％，以12000r/min，20min去除不溶物，再以蒸馏水为透析液反复透析，收集透析袋内液体，加等体积95％乙醇搅拌，得沉淀，真空干燥沉淀后即得γ-PGA纯品。