乳酸菌发酵生产亚硝酸还原酶的方法

摘要：

本发明提供一种乳酸菌发酵生产亚硝酸还原酶的方法，将产生亚硝酸还原酶的乳酸菌进行活化、按常规方法逐级扩大培养，制备成液体种子；按发酵液体积的3～8％接种量接入液体产酶培养基中，在26～32℃培养36～72h时，添加40～150mg/L亚硝酸盐，再培养12～24h，即乳酸菌发酵生产亚硝酸还原酶结束；这种生产方法获得的亚硝酸还原酶粗酶液活性可以达到2600U/ml，如再经过分离和纯化，可以得到不同浓度、纯度和剂型的酶制剂。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200510073389.3

申请日期：2005-06-03

公开/公告号：CN1687408

公开/公告日：2005-10-26

主分类号：C12N9/02

申请/专利权人:张庆芳%迟乃玉

发明/设计人:张庆芳;迟乃玉

主申请人地址:116622辽宁省大连市经济技术开发区,大连大学生物工程学院

国别省市代码:辽宁;21

权利要求：

1.一种乳酸菌发酵生产亚硝酸还原酶的方法，其包括以下步骤：(1)将产生亚硝酸还原酶的乳酸菌按常规方法进行活化、逐级扩大培养，制备成液体一级种子和二级种子；(2)将液体一级种子或二级种子，按发酵液体积的3～8％接种量接入液体产酶培养基中，在26～32℃培养36～72h时，添加40～150mg/L亚硝酸盐，再培养12～24h；(3)将(2)的发酵液在8,000～10,000rpm，离心收集乳酸菌菌体；(4)用(3)收集到的菌体体积2～3倍pH值7.0的缓冲液清洗，待菌体完全悬浮后，在8,000～10,000rpm下离心收集乳酸菌菌体，重复上述清洗菌体操作2～3次，最终将菌体制备成乳酸菌菌悬液；(5)将(4)制备成的乳酸菌菌悬液减压破碎菌体；(6)将(5)得到的菌体破碎悬液在12,000～140,000rpm、4℃离心，收集到的上清液即为粗酶液。