一种诱导分化人外周血单个核细胞的方法
本发明属生物技术领域，涉及一种将人外周血单个核细胞诱导分化为心肌细胞的培养方法。本发明方法从人外周血分离出单个核细胞，通过体外直接培养，用5-氮杂胞苷诱导其分化为心肌细胞。本发明方法诱导后的外周血单个核细胞具有心肌细胞的部分特点，又具有干细胞的特征。本方法可最大限度利用有分化潜力的干细胞，避免成体干细胞的损失。为人外周血单个核细胞诱导分化的分离和培养建立了方法学，为此类研究奠定了基础。本发明还为诱导后的单个核细胞回输体内后进一步分化为成熟的、有功能的心肌细胞，恢复心脏功能的临床应用提供了准备。
发明专利
CN200510067523.9
2005-04-18
CN1683523
2005-10-19
C12N5/08
上海市第一人民医院
孙宝贵;李为真;戴秋艳
200080上海市武进路85号
上海正旦专利代理有限公司
包兆宜
上海;31
1、一种诱导分化人外周血单个核细胞的方法，其特征在于采用分离人外周血单个核细胞后，经体外直接培养、5-氮杂胞苷诱导分化得到心肌细胞，包括下述步骤，1)分离人外周血单个核细胞：取人股动脉抗凝血10-15ml，用Ficoll密度梯度离心法分离出人外周血单个核细胞；2)体外培养人外周血单个核细胞：含20％FBS的DMEM培养液、培养箱37℃2、5％CO2，将人外周血单个核细胞种植于包被有明胶的培养瓶中或小玻片上；3)诱导分化人外周血单个核细胞：DMEM培养液中加入5-氮杂胞苷10μmol/L；将人外周血单个核细胞种植于包被有明胶的培养瓶中或小玻片上；4)鉴定心肌细胞标志：进行细胞形态学观察、相关蛋白的免疫细胞化学染色和相关基因的RT-PCR检测。