人卵巢癌耐药细胞株及其培养方法
本发明涉及一种人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株SKOV3/TAX或拓扑替康耐药细胞株SKOV3/TOP及其培养方法,其特征是选择人卵巢癌细胞株SKOV3作为亲代细胞,选用TAX的终浓度为300ug/ml或TOP的终浓度为2160ng/ml作为大剂量冲击用量,以反复大剂量冲击方式间歇用药,建立SKOV3/TAX细胞耐药指数(RI)为10.57,除对TAX耐药外,对5-氟尿嘧啶有明显的交叉耐药,SKOV3/TO P细胞耐药指数(RI)为10.67,除对TOP耐药外,对米托蒽醌(MX)、喜树碱(CPT)、长春新碱(VCR)有明显的交叉耐药,与敏感细胞相比P<0.01。
发明专利
CN200510064798.7
2005-04-22
CN1687405
2005-10-26
C12N5/10
李红霞
李红霞;周友珍;张素梅;魏丽惠
100038北京市海淀区北京世纪坛医院妇产科
北京市商泰律师事务所
谷胜斌
北京;11
1、一种人卵巢癌耐药细胞株培养方法,其特征在于:(1)药物:拓扑替康(TOP)或紫杉醇(TAX);(2)用药剂量:采用TAX的终浓度为300ug/ml或TOP的终浓度为2160ng/ml作为大剂量冲击用量;(3)亲代细胞培养:人卵巢上皮癌细胞株SKOV3细胞生长于含15%小牛血清的RPMI1640培养基中,置入5%CO2、37℃培养箱中培养;(4)卵巢癌耐药细胞株诱导:取对数生长期细胞,0.25%的胰酶消化后计数,以5×105/ml细胞接种于培养瓶(以每瓶5ml接种),24小时后细胞贴壁,再加入终浓度为300ug/ml的TAX或终浓度为2160ng/ml的TOP作用2小时,弃去培养液,用磷酸盐缓冲液(PBS)洗3遍,更换新鲜培养液,待细胞恢复生长再进行第二次冲击,如此反复作用,TAX共加药冲击12次或TOP共加药冲击13次,历时10个月建成人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/TAX、或SKOV3/TOP。