构建植物病毒弱病毒株的方法
本发明公开了一种构建植物病毒弱病毒株的方法。步骤如下:1)根据植物病毒卫星RNA两端保守序列,设计PCR引物,进行RT-PCR扩增,获得卫星RNA的cDNA,将全长卫星RNA的cDNA构建到质粒上,然后进行测序,确定其序列;2)将全长卫星RNA的cDNA或者序列改造后的cDNA进行体外转录,获得纯化的卫星RNA转录产物;3)预先接种强毒株至系统寄主,在接种叶或邻近叶片上,再接种上述体外转录的卫星RNA转录产物获得假重组,假重组后,取接种叶扩大接种,获得具备卫星RNA的弱病毒株。本发明的方法大大提高筛选植物病毒弱病毒株的速度,通过在cDNA水平上的卫星RNA序列改造,可以获得性状更优的卫星RNA变异株,提高卫星RNA介导的弱病毒保护效果,明显提高果实品质。
发明专利
CN200510048952.1
2005-01-12
CN1654638
2005-08-17
C12N7/01
浙江理工大学
陈集双;竺锡武;金波;廖乾生;商晗武;陈海敏
310018浙江省杭州市下沙2号路高校园区
杭州求是专利事务所有限公司
张法高
浙江;33
1.一种构建植物病毒弱病毒株的方法,其特征在于:方法步骤如下:1)根据植物病毒卫星RNA两端保守序列,设计PCR引物,进行RT-PCR扩增,获得卫星RNA的cDNA,将全长卫星RNA的cDNA构建到质粒上,然后按照常规分子克隆方法进行测序,确定其序列;2)将全长卫星RNA的cDNA进行体外转录,获得纯化的卫星RNA转录产物;3)预先接种强毒株至系统寄主,2-55天,在接种叶或邻近叶片上,再接种上述体外转录的1种或2-20种卫星RNA转录产物,获得假重组;或者将转录的1种或2-20种卫星RNA转录产物,与辅助病毒的总RNA或从强病毒株侵染的植株组织中提取的总RNA,同时接种敏感的系统寄主,获得假重组。假重组后1-20天,取接种叶扩大接种,获得具备一个或者多个卫星RNA的弱病毒株。