一种血管平滑肌的消化方法

摘要：

一种血管平滑肌的消化方法，属于生物医学技术领域。向血管平滑肌组织块中，加入用DMEM配制的0.15％胶原酶II溶液，水浴箱中作用1.5h，至组织呈絮状，用0.02％的EDTA清洗，然后，加入0.125％胰蛋白酶溶液，于37℃水浴振荡消化，即可得到分散的平滑肌细胞，用10％新生牛血清的培养液终止酶的作用。加入含20％新生牛血清的培养液，调节细胞密度为5×10⁴～5×10⁵个/L，接种，放入5％CO₂、37℃培养箱中培养。当细胞达到70％～80％融合时即可按常规方法传代。本发明方法使用的酶的种类少、成本低；步骤简便，可用于医学、生物学等领域。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200510042438.7

申请日期：2005-02-03

公开/公告号：CN1673357

公开/公告日：2005-09-28

主分类号：C12N5/06

申请/专利权人:山东大学

发明/设计人:邢毅;李振中;王钰童;李淑玲;黄飞;李永刚

主申请人地址:250012山东省济南市历城区山大南路27号

专利代理机构:济南金迪知识产权代理有限公司

代理人:赵会祥

国别省市代码:山东;37

权利要求：

1.一种血管平滑肌的消化方法，步骤如下：a.将处理好的血管平滑肌组织块置于离心管中，加入平滑肌组织体积8-10倍的、用DMEM配制的0.15％胶原酶II溶液，置于37℃水浴箱中作用1.2h-1.5h至组织呈絮状，弃去上清液；b.再用平滑肌组织体积3-5倍的0.02％乙烯二胺四乙酸清洗消化成絮状的平滑肌组织；然后c.加入平滑肌组织体积3-5倍的0.125％胰蛋白酶溶液，于37℃水浴振荡消化1-2次，每次10min-15min，得分散的平滑肌细胞悬液；d.再向分散的平滑肌细胞悬液中加入新生牛血清，经3000r离心7min-8min，弃去上清液；e.加入用DMEM配制的含20％新生牛血清的培养液，用计数板计数细胞，调节细胞密度为5×104～5×105个/ml；f.将调整好密度的细胞悬液2～3ml，接种于25ml培养瓶中，放入5％CO2、37℃培养箱中培养，第3-4天更换新鲜培养液，细胞达到70％～80％融合，即可；以上各组分的浓度均为重量百分比。