一种带亮氨酸拉链结构域蛋白单克隆抗体的制备及鉴定方法

摘要：

带亮氨酸拉链结构域蛋白单克隆抗体的制备及鉴定方法，是一种单克隆抗体的制备及鉴定方法，其制备的方法为：根据ecp基因全长cDNA序列设计上、下游两条引物进行PCR扩增；用纯化的ECP-GST融合蛋白免疫6～8周龄Balb/c雌鼠；取小鼠脾脏细胞与骨髓瘤Sp2/0细胞在聚乙二醇作用下进行体外融合，得到抗ECP的单克隆抗体。鉴定的方法为：细胞上清mAb的效价测定：mAb的Ig亚类测定：mAb特异性鉴定：抗原表位的确定：结果表明，此抗体识别的抗原表位在231～300aa这一区段内。利用该抗体可以高效、特异性的在果蝇各组织中检测到ECP蛋白的表达；同时，利用该抗体，在小鼠不同组织中也能检测到阳性信号，具有潜在的广谱性应用价值。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200510040404.4

申请日期：2005-06-07

公开/公告号：CN1710078

公开/公告日：2005-12-21

主分类号：C12N15/62

申请/专利权人:东南大学

发明/设计人:谢 维;刘加彬;汪道涌;张建琼

主申请人地址:210096江苏省南京市四牌楼2号

专利代理机构:南京经纬专利商标代理有限公司

代理人:叶连生

国别省市代码:江苏;32

权利要求：

1、一种带亮氨酸拉链结构域蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于制备的方法为：步骤1)、根据ecp基因全长cDNA序列设计上、下游两条引物进行PCR扩增，扩增产物与载体连接构成重组质粒，转化大肠杆菌，异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达得到ECP-谷光甘肽转移酶融合蛋白，并将其纯化，步骤2)、用纯化的ECP-GST融合蛋白免疫6～8周龄Balb/c雌鼠，步骤3)、取小鼠脾脏细胞与骨髓瘤Sp2/0细胞在聚乙二醇作用下进行体外融合，经筛选，得到能稳定分泌抗ECP单克隆抗体的细胞株，用抗体纯化试剂盒从该细胞株的培养上清中纯化得到抗ECP的单克隆抗体。