暂态表达重组蛋白鸡输卵管生物反应器的制造方法
暂态表达重组蛋白鸡输卵管生物反应器的制造方法，属于基因工程和生物制药领域。本发明的技术方案包括鸡卵清蛋白基因调控序列的分子克隆、鸡输卵管高效表达载体的构建及优化、基因转染剂的选择、重组载体注射方法、剂量和次数的选择。与现有的同类技术相比，该发明不仅具有非手术、经济、实用等优点，而且目的基因的表达水平高、表达维持时间长、表达产物的活性完全。表达在蛋清中的重组蛋白既可以纯化后作为防治人、畜疾病的药物，也可以不经纯化直接作为人类的保健品或动物的饲料添加剂进行开发。
发明专利
CN200510038300.X
2005-01-28
CN1673370
2005-09-28
C12N15/12
扬州大学
孙怀昌
225009江苏省扬州市大学南路88号
扬州市锦江专利事务所
江平
江苏;32
1、暂态表达重组蛋白鸡输卵管生物反应器的制造方法，包括以下步骤：a、分子克隆鸡卵清蛋白基因调控序列：根据已发表的鸡卵清蛋白基因序列(GenBank登录号GI：212504)设计引物，以中国狼山鸡基因组DNA为模板，用高保真多聚酶链式反应(PCR)克隆长度分别为3.0kb的5′和3′鸡卵清蛋白基因调控序列；b、构建鸡输卵管特异表达载体：对pHC粘粒载体修饰获得pHC20载体；对pcDNA3.0真核表达载体修饰获得pcDNA2.2载体；将鸡卵清蛋白基因的5′和3′调控序列同时克隆入pHC20载体，获得pOV1鸡输卵管特异表达载体；将鸡卵清蛋白基因的5′和3′调控序列同时克隆入pcDNA2.2载体，获得pOV2鸡输卵管特异表达载体；将鸡卵清蛋白基因的5′调控序列克隆入pcDNA2.2载体，获得pOV3鸡输卵管特异表达载体；c、将含人组织激肽释放酶基因(GenBank登录号为GI：22027643)的三种鸡输卵管特异表达重组载体与选定的鸡体内基因转染剂25kDa聚乙烯亚胺(PEI)混合，比例为1微克DNA∶2微升PEI，分别经翅静脉注射产蛋鸡，注射剂总量为2～3毫克重组载体，分一次或两次注射。