一种杨树的农杆菌基因转化方法

摘要：

本发明公开了一种杨树(新疆杨)的农杆菌基因转化方法，该方法包括从外植体选择、培养基筛选、激素调配、抗生素敏感性、培养条件等方面建立新疆杨高效遗传转化受体技术系统，本发明的有益效果是：通过建立高效的新疆杨遗传转化系统，在短时间内可选育出新疆杨抗逆新品种。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200510037948.5

申请日期：2005-03-03

公开/公告号：CN1657629

公开/公告日：2005-08-24

主分类号：C12N15/82

申请/专利权人:南京林业大学

发明/设计人:诸葛强;王婕琛;陈英;黄敏仁;王明庥;潘惠新;李火根;王光萍

主申请人地址:210037江苏省南京市龙蟠路新庄9号

专利代理机构:南京苏高专利事务所

代理人:柏尚春

国别省市代码:江苏;32

权利要求：

1、一种杨树的农杆菌基因转化方法，其特征是该方法包括以下步骤：(1)将新疆杨试管苗置于基本培养基上继代繁殖；(2)在继代的试管苗上选取幼嫩、平展的叶，剪去叶边缘，剪成预定面积的叶盘为外植体，接种于叶盘分化培养基T上预培养；(3)挑取农杆菌的菌落接种到含有四环素和链霉素的YEB液体培养基中，振荡培养时间后，取预定体积转接至YEB液体培养基，待菌体进入指数生长期，通过离心得到菌体，取基本培养基MS液体培养基悬浮菌体，获得侵染菌液；(4)将步骤(2)的预培养后的叶盘浸入步骤(3)的侵染菌液，振荡，浸泡后，除去多余菌液，放回叶盘分化培养基T上进行共培养；(5)对共培养后的叶盘洗涤除去农杆菌，叶柄转移到叶柄分化筛选培养基T3上培养，叶盘转移到叶盘分化初次筛选培养基T1上培养，一段时间后，换用叶盘分化二次筛选培养基T2，直至分化出可见Kmr芽；(6)将Kmr芽连同外植体一同移入不定芽伸长筛选培养基Y继代培养；(7)待Kmr芽伸长至一定长度，将每个Kmr芽分离独立接入不定芽伸长筛选培养基Y筛选，2-3周继代一次，至Kmr芽长至一定长度后，移入生根筛选培养基G。