改造重组家蚕核型多角体病毒的基因工程载体的构建方法

摘要：

本发明公开了一种改造重组家蚕核型多角体病毒的基因工程载体构建方法，其步骤包括PCR分别克隆病毒的ChiA片段和CP片段；将该二片段同时克隆进细菌质粒，构建中间质粒；将带有家蚕核型多角体病毒完整多角体蛋白基因编码区以及启动子的片段克隆进中间质粒内，获得改造的常规重组家蚕核型多角体病毒的基因工程载体。该载体与多角体蛋白基因被外源基因取代的重组家蚕核型多角体病毒DNA共转染家蚕细胞，可获得同时失活了几丁酶、半胱氨酸蛋白酶二基因的、可形成多角体的新重组病毒。新重组病毒在细胞和家蚕中表达外源基因的水平有明显提高，明显减少病毒感染后期由细菌所引起的继发感染，并可通过食下高效感染家蚕。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200510037703.2

申请日期：2005-01-25

公开/公告号：CN1673379

公开/公告日：2005-09-28

主分类号：C12N15/86

申请/专利权人:苏州大学

发明/设计人:贡成良;曹广力;薛仁宇;魏育红;朱越雄;沈卫德

主申请人地址:215006江苏省苏州市沧浪区十梓街1号

专利代理机构:苏州创元专利商标事务所有限公司

代理人:陶海锋

国别省市代码:江苏;32

权利要求：

1.一种改造重组家蚕核型多角体病毒的基因工程载体的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)设计引物，采用聚合酶连反应技术分别克隆含家蚕核型多角体病毒的几丁质酶基因编码区片段ChiA和半胱氨酸蛋白酶基因编码区片段CP；(2)将按步骤1获得的ChiA和CP二片段按家蚕核型多角体病毒中几丁质酶基因、半胱氨酸蛋白酶基因在基因组中的组织顺序同时克隆进细菌质粒，构建中间质粒pBmChiA-CP；(3)将带有家蚕核型多角体病毒完整多角体蛋白基因编码区以及启动子的polh片段克隆进按步骤2构建的pBmChiA-CP质粒的ChiA、CP二片段之间，获得改造重组家蚕核型多角体病毒的基因工程载体pBmChiA-polh-CP。