一种通用引物联合标记法
本发明公开了一种通用引物联合标记法,该方法设计了一种与病毒、细菌和人类基因同源性较低的通用引物U和随机通用引物UNN,通过优化的两轮扩增可以同时对各种微量的单链或双链DNA样品进行大量扩增标记并用于临床检测型芯片的杂交,从而能检测多种微量的临床样品。与常用的样品标记方法比较,本发明是一种高效、灵敏的荧光标记方法。
发明专利
CN200510033396.0
2005-03-07
CN1683563
2005-10-19
C12Q1/68
中国人民解放军基因工程研究所
马文丽;郑文岭;徐秋林;石嵘;李凌
510515广东省广州市同和南方医科大学科技楼六楼
广州知友专利代理有限公司
李海波
广东;44
1、一种通用引物联合标记法,包括以下步骤:1)用oligo6.0设计通用引物U和随机通用引物UNN,其中所述通用引物U为CTATACTGAGTCGTTGATC,所述随机通用引物UNN为CTATACTGAGTCGTTGATCNN,N代表G、A、T、C;2)对于RNA样品,先用随机通用引物UNN在逆转录酶的作用下逆转录合成cDNA第一链,然后再用于下面的两轮扩增标记,对于DNA单链或双链样品,可以直接用于下面的两轮扩增标记;3)样品的第一轮扩增:用随机通用引物UNN对DNA单链或双链样品在Taq酶的作用下进行两个循环的扩增,产生两端带有通用引物U的互补序列的DNA片段;4)样品的第二轮扩增:第一轮扩增样品可通过下述两种荧光标记方法进行第二轮扩增标记:a)用cy3-U或cy5-U扩增标记第一轮的扩增产物,得到用于杂交的荧光标记样品;b)用通用引物U对第一轮扩增产物进行扩增的过程中掺入荧光标记的dUTP或dCTP,得到用于杂交的荧光标记样品。