巴士德毕赤酵母GS115/PFK-K5的高密度发酵方法
本发明涉及一种巴士德毕赤酵母GS115/PFK-K5的高密度发酵方法。本发明方法包括以下步骤:种子的培养、接种前准备及接种;补料生长阶段:该阶段包括补加甘油和组氨酸;甲醇诱导巴士德毕赤酵母表达PFK-K5:在补料生长阶段结束,即当菌体湿重达到180~220g/L时,停止补加甘油,当甘油彻底耗尽后,开始甲醇诱导,首次补加含PTM<sub>1</sub> 12ml/L的甲醇,同时添加5~12%组氨酸至使发酵液终浓度达到0.01~0.5%,待甲醇耗尽后,再次补加含PTM<sub>1</sub>12ml/L的甲醇,如此诱导表达36~60小时后结束发酵;分离提取。采用本发明的巴士德毕赤酵母GS115/PFK-K5高密度发酵法,使巴士德毕赤酵母的菌体量和外源蛋白表达量均有大幅度提高。
发明专利
CN200510025862.0
2005-05-17
CN1699550
2005-11-23
C12N1/19
上海大学
陈宇光;余 波
200444上海市宝山区上大路99号
上海上大专利事务所
何文欣
上海;31
1.巴士德毕赤酵母GS115/PFK-K5的高密度发酵方法,其特征在于该方法,包括以下步骤:(1)种子的培养、接种前准备及接种;(2)补料生长阶段:该阶段包括补加甘油和组氨酸:A.补加甘油:在发酵罐发酵过程中甘油耗尽时,即溶氧水平DO陡然上升时,开始补加含PTM112ml/L的50%甘油;如此反复直到菌体湿重量达到180~220g/L;B.补加组氨酸:在发酵罐发酵过程中,当溶氧水平DO开始缓慢上升时,添加浓度为5~12%组氨酸溶液至发酵液终浓度0.01~1%;(3)甲醇诱导表达阶段:在补料生长阶段结束,即菌体湿重达到180~220g/L,停止补加甘油,甘油彻底耗尽后,开始补加含PTM112ml/L的甲醇诱导表达PFK-K5,同时添加5~12%组氨酸至使发酵液终浓度达到0.01~0.5%,待甲醇耗尽后,再次补加甲醇,如此诱导表达36~60小时后结束发酵;(4)表达产物的分离提取。