H5亚型高致病性禽流感病毒血凝素基因抗原蛋白

摘要：

一种H5亚型高致病性禽流感病毒血凝素基因抗原蛋白，属于生物技术领域，特别是涉及一种H5亚型禽流感病毒基因抗原蛋白。本发明提供一种能有效检测致病致死率极高的禽流感H5亚型的HA抗体的H5亚型高致病性禽流感病毒血凝素基因抗原蛋白。本发明首先将pUCM-TH5HA质粒由BamH I、EcoRV双酶切，得到的pPIC9K质粒由EcoR I线性化，再经T4连接酶连接获得质粒pPIC9K-H5HA；用Sal I线性化pPIC9K-H5HA重组质粒，经过一系列工作后即得到H5HA抗原蛋白。本发明表达量高、特异性强、易于纯化、具有完整的空间构象等特点完全符合ELISA快速检测试剂盒的鉴定要求。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200510017149.1

申请日期：2005-09-21

公开/公告号：CN1936014

公开/公告日：2007-03-28

主分类号：C12P21/02(2006.01)I

申请/专利权人:金宁一

发明/设计人:金宁一;徐一鸣;鲁会军;李 昌;韩 松;金扩世

主申请人地址:130062吉林省长春市青龙路1068号

专利代理机构:吉林长春新纪元专利代理有限责任公司

代理人:白冬冬

国别省市代码:吉林;22

权利要求：

1、一种H5亚型高致病性禽流感病毒血凝素基因抗原蛋白的制备方法，其特征在于：首先将pUCM-TH5HA质粒由BamH I、EcoRV双酶切，经补平后回收得到目的片段；pPIC9K质粒由EcoR I线性化，两端分别补平、去磷后回收；将以上回收产物经T4连接酶连接后即获得目的质粒pPIC9K-H5HA；再用SalI线性化pPIC9K-H5HA重组质粒，线性化后将其电转化至GS115感受态中，再在MD平板中培养，而后挑取单个菌落于YPD培养基中复苏，提重组体基因组进行PCR鉴定，筛选出的阳性菌株于BMGY培养基中摇菌，离心后转至BMMY培养基中开始甲醇诱导，产物离心后取上清，加入饱和硫酸铵沉淀蛋白，收集蛋白进行进一步纯化即得到H5HA抗原蛋白。