人类细胞周期素A基因的提取与纯化方法
本发明属于人类细胞周期素A基因的制备方法，涉及一种人类细胞周期素A基因的提取与纯化的方法。从大肠杆菌中提取含有基因片段的质粒，经过限制性内切酶消化后，通过琼脂糖凝胶电泳分离基因片段与载体，从凝胶中回收细胞周期素A基因片段并纯化。这种方法不会对基因产生损伤，而且具有较高的回收率。本发明的方法可以用于提取和纯化人类细胞周期素A基因。
发明专利
CN200510016716.1
2005-04-18
CN1696303
2005-11-16
C12P19/34
中国科学院长春应用化学研究所
曲晓刚;包蕙心
130022吉林省长春市人民大街5625号
长春科宇专利代理有限责任公司
马守忠
吉林;22
1、一种人类细胞周期素A基因的提取与纯化方法，其步骤包括(1)从大肠杆菌中用碱裂解法提取质粒pGEM-人类细胞周期素A基因，其特征在于还包括如下步骤：(2)提取的质粒pGEM-人类细胞周期素A基因用限制性内切酶EcoRI消化称之为酶切法，具体的酶切方法是采用如下的物质与配比：限制性酶切酶EcoRI4～8μl10×缓冲液5～10μl带有人细胞周期素A基因的质粒45～50μl灭菌水80～90μl保持总体积：150μl反应条件：温度为35～40℃，时间为8～24小时质粒pGEM-人类细胞周期素A基因浓度为10～15μg(3)待质粒pGEM-人类细胞周期素A基因消化完全后，用0.7％的琼脂糖凝胶电泳分离基因片段和载体，在100V电压下保持2.5小时；人类细胞周期素A基因片段与载体经琼脂糖凝胶电泳分离后，在紫外灯下将人类细胞周期素A基因条带尽可能窄的切下来，切成小块后装入离心管中，加入20℃的纯水中正好将其淹没，放置12小时，并振摇数次；然后用最大转速1200r/min离心机离心10分钟，使琼脂糖胶块沉在离心管底部，吸出的上层水溶液即为回收的人类细胞周期素A基因溶液；经过与它的体积比为1∶1的酚—氯仿抽提去除蛋白后，装入透析袋对水透析24小时；透析后的水溶液在真空度为50×10-3Pa，温度为-50℃的条件下，经冻干机冻干成粉末，用缓冲液溶解；沉在离心管底部的凝胶可以再次浸泡，使人类细胞周期素A基因全部深出。