假单胞菌Na⁺/H⁺逆向转运蛋白基因及其克隆方法

摘要：

假单胞菌Na⁺/H⁺逆向转运蛋白基因及其克隆方法，涉及一种基因克隆。提供一种假单胞菌的Na⁺/H⁺逆向转运蛋白结构基因及一种既快捷又经济的克隆方法，基因长1089bp，编码362个氨基酸。步骤为将极端耐盐假单胞菌接种，培养；提取总DNA；设计引物；PCR反应并将扩增产物凝胶成像系统扫描记录，切下扩增的约1.1kb的条带；在PCR产物末端加上一个腺嘌呤脱氧核糖核苷酸(A)，弃上清液，加入20μL重蒸水溶解DNA；载体与DNA的连接，形成单菌落；挑选白色菌落，碱裂解法提取重组质粒；鉴定所扩增的目的基因；检测转化子的耐盐水平；转化子中的重组质粒经鉴定，对其中的克隆基因进行测序；判断克隆基因。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200510006572.1

申请日期：2005-02-23

公开/公告号：CN1667122

公开/公告日：2005-09-14

主分类号：C12N15/31

申请/专利权人:厦门大学

发明/设计人:刘广发;陈启伟

主申请人地址:361005福建省厦门市思明南路422号

专利代理机构:厦门南强之路专利事务所

代理人:马应森

国别省市代码:福建;35

权利要求：

1、假单胞菌Na+/H+逆向转运蛋白基因，其特征在于其序列如下：1ATGATTATGGCCAACAGCGGCGCAACCAGTGGATGGTATCACGACTTTCTGGAGACGCCG6061TTCACTCGGTTGGTTCACTCGAAATCAAGCAAAAACATGCTGTTATGGATAAATGACGCG120121CTGATGGCGGTATTTTTCCTGTTAGTCGGTCTGGAAGTTAAACGTGAACTGATGCAAGGA180181TCGCTAGCCAGCTTACGCCAGGCCGCATTTCCAGTTATCGCCGCTATTGGTGGGATGATT240241GTGCCGGCATTACTCTATCTGGCTATTAACTATGCCGATCCGATTACCCGCCAAGGGTGG300301GCGATCCCGGCGGCTACTGACATTGCTTTTGCACTTGGTGTACTGGCGCTGTTGGGAAGT360361CGTGTTCCGTTTGCGCTGAAGATCTTTATGATGGCTCTGGCTATTATCGACGATCTTGGG420421GCCATCATTATCATCGCATTGTTCTACACTAATGACTTATCGATGGCCTCTCTTGGCCTC480481GCGGCTGTAGCATTTGCGGTACTCGCGGTATTGAATCTGTGTGGTGCACGCCGCACGGGC540541GTCTATATTCTTGTTGGCGTGGTGTTGTGGACTGCGGTGTTGAAATCGGGGGTTCACGCA600601ACTCTGGCGGGGGTAATTGTCGGCTTCTTTATTCCTTTGAAAGAGAAGCATGGGCCTTCT660661CCAGCGAAGCGACTGGAGCATGTGTTGCACCCGTGGGTGGCGTATCTGATTTTGCCGCTG720721TTTGCATTTGCTAATGCTGGCGTTTCACTGCAAGGCGTCACGCTGGATGGCTTGACCTCC780781ATTCTGCCATTGGGGATCATCGCTGGCTTGCTGATTGGCAAACCGCTGGGGATTAGTCTG840841TTCTGCTGGTTGGCGCTGCGTTTGAAACTGGCGCATCTGCCTGAGGGAACGACTTATCAG900901CAAATTATGGTGGTGGGGATCGTGTGCGGTATCGGTTTTACTATGTCTATCTTTATTGCC960961AGCCTGGCCTTTGGTAGCGTAGATCCAGAACTGATTAACTGGGCGAAACTCGGTATCCTG10201021GTCGGTTCTATCTCTTCGGCGGTAATTGGATACAGCTGGTTACGCGTTCGTTTGCGTCCA10801081TCAGTTTGA1089本基因基因长1089bp，编码362个氨基酸。根据原核基因的特征分析，序列的前3个核苷酸“ATG”(黑体字)为基因的起始密码子；接着，根据三联体密码，推算出该基因的编码氨基酸序列；最后的3个核苷酸“TGA”(黑体字)为基因的终止符；通过BLAST软件分析，该基因推测的编码氨基酸序列如下：MIMANSGATSGWYHDFLETPFTRLVHSKSSKNMLLWINDALMAVFFLLVGLEVKRELMQGSLASLRQAAFPVIAAIGGMIVPALLYLAINYADPITRQGWAIPAATDIAFALGVLALLGSRVPFALKIFMMALAIIDDLGAIIIIALFYTNDLSMASLGLAAVAFAVLAVLNLCGARRTGVYILVGVVLWTAVLKSGVHATLAGVIVGFFIPLKEKHGPSPAKRLEHVLHPWVAYLILPLFAFANAGVSLQGVTLDGLTSILPLGIIAGLLIGKPLGISLFCWLALRLKLAHLPEGTTYQQIMVVGIVCGIGFTMSIFIASLAFGSVDPELINWAKLGILVGSISSAVIGYSWLRVRLRPSV