改进的碱裂解法提取基本纯质粒的方法及多层层析装置

摘要：

提供一种用碱裂解法提取基本纯质粒的方法，包括用碱性裂解液裂解工程菌、用中和液中和并使杂质凝聚及将含质粒的澄清液经离子交换层析柱或交换膜纯化，其中裂解步骤中直接采用能表达牛胰腺RNA酶的重组工程菌匀浆液；杂质凝聚步骤中先加入pH4.8-5.5的3M醋酸钾水溶液中和裂解液并凝聚杂质，在即将进行离子交换层析前加入混合有机酸液调节澄清液至酸性；纯化步骤中采用笼格式常压多层层析装置进行快速离子交换层析。本发明还提供这种笼格式常压多层层析装置。本发明的方法和装置简化了后续纯化步骤、节约了采用纯化牛胰腺RNA酶的成本及避免了传播疯牛病的危险，可快速有效并大量制备质粒。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200410093322.1

申请日期：2004-12-21

公开/公告号：CN1648248

公开/公告日：2005-08-03

主分类号：C12N15/10

申请/专利权人:刘庆良%李忠明

发明/设计人:刘庆良;李忠明

主申请人地址:200051上海市安顺路330号502室

专利代理机构:上海协和专利代理有限公司

代理人:张恒康

国别省市代码:上海;31

权利要求：

1.一种改进的碱裂解法提取基本纯质粒的方法，包括用碱性裂解液裂解工程菌的裂解步骤、用中和液中和并使杂质凝聚的杂质凝聚步骤，和将含质粒的澄清液经离子交换层析柱或交换膜纯化的纯化步骤，其特征在于：(1)裂解步骤中直接采用表达牛胰腺RNA酶的重组大肠杆菌的匀浆液来去除RNA杂质；(2)杂质凝聚步骤中先加入pH4.8-5.5的3M醋酸钾水溶液中和裂解液并凝聚杂质，在即将进行离子交换层析前加入混合有机酸液调节澄清液至酸性；(3)纯化步骤中采用笼格式常压多层层析装置进行快速离子交换层析。