利用数据性状位点信息进行作物功能基因电子克隆的方法
本发明属功能基因电子克隆技术领域,具体为一种利用与作物抗道相关的QTL信息进行作物功能基因电子克隆的方法。该方法选择感兴趣的QTL作为查询探针,利用QTL内部的核苷酸序列进行分析,包括利用QTL序列搜索dbEST库,利用基因预测软件对该QTL序列进行基因预测,并将该序列与该作物基因组BAC文库进行同源比对等步骤,最后根据预测的功能基因设计PCR引物,通过RT-PCR方法获得cDNA克隆。本发明方法预测结果的可靠性高,是发现QTL内部所包含功能基因的一种新方法。本方法对作物没有特异性要求,故具有广泛的适用性。
发明专利
CN200410084571.4
2004-11-25
CN1683530
2005-10-19
C12N15/09
复旦大学%上海市农业生物基因中心
曾华宗;罗利军;钟扬
200433上海市邯郸路220号
上海正旦专利代理有限公司
陆飞%盛志范
上海;31
1、一种进行作物功能基因电子克隆的方法,其特征在于利用作物抗逆相关的数据性状位点-QTL信息进行功能基因的电子克隆,具体步骤如下:选择感兴趣的QTL作为查询探针,利用QTL内部的核苷酸序列进行如下分析:(1)利用QTL内部的核苷酸序列搜索dbEST库,找到与该序列同源的所有抗逆相关的EST序列;(2)利用基因预测软件对该QTL序列进行基因预测,找到该序列内部所有涉及的基因;(3)将该序列与该作物基因组BAC文库进行同源比对,以找到该序列所对应的作物基因组BAC文库;(4)综合上述三个步骤的结果,将EST序列定位在基因预测结果的相对位置,同时用这些预测的功能基因与作物BAC文库中预测的功能基因进行比较,以进一步预测结果的准备性;(5)最后根据预测的功能基因设计PCR引物,通过RT-PCR的方法获得目的cDNA克隆并进行序列测定验证。