一种定量PCR检测试剂盒及用于检测副溶血性弧菌的方法
涉及一种荧光定量PCR试剂盒以及用于检测副溶血性弧菌的方法，该试剂盒由PCR反应液管、样本处理液管、阳性对照管、阴性对照管、标准品管、Taq DNA聚合酶管和去离子水管组成，该试剂盒用于副溶血性弧菌的适时、定量检测的步骤是，先采集和处理待测标本再进行加样、分子信标实时定量PCR检测，根据阴性对照和阳性对照的CT值以及检测样本CT值来判断检测样本为阳性还是阴性，然后记录各样本的荧光值和CT值，并从计算机上获取标准曲线，计算各样本中的副溶血性弧菌拷贝数。本发明具有闭管操作，避免假阳性，反应与杂交同步进行，检测时间短的显著效果。
发明专利
CN200410077367.X
2004-12-17
CN1676613
2005-10-05
C12Q1/68
南方医科大学
万成松
510515广东省广州市广州大道北1838号
广州市天河庐阳专利事务所
胡济元
广东;44
1.一种定量PCR检测试剂盒，其特征在于该试剂盒由以下试管组成：(1)PCR反应管：管内反应液由以下体积份组分制成：10×Buffer缓冲液4～6份、25mMMgCl2溶液2～4份、1.25mMdNTP溶液4～8份、序列为5’-TGGCTGACATCCTACATGAC-3’的50μM上游引物0.2～1.0份、序列为5’-TCTTCACCAACAAAGTTAGC-3’的50μM下游引物0.2～1.0份、序列为5’-FAM-CGAGCGGCTATAAGCACGGTCATTCTGCTGGCTCG-DABCYL-3’的50μM环形分子信标探针0.2～1.0份、去离子水25～30份；(2)样本处理液管：管内处理液由以下体积份组分制成：0.5mol/LEDTA(PH8.0)8～12份、1％SDS200～300份、20mg/ml蛋白酶K5～8份和蒸馏水200～250份；(3)阳性对照管：管内试剂为以下插入序列的重组阳性质粒DNA：GGTCAATGTAGAGGTCTCTGACTTTTGGACAAACCGTAATGTAAAAAGAAAACCGTACAAAGATGTTTATGGTCAATCAGTATTCACAACGTCAGGTACTAAATGGCTGACATCCTACATGACTGTGAACATTAATGATAAAGACTATACAATGGCAGCGGTGTCTGGCTATAAGCACGGTCATTCTGCTGTGTTCGTAAAATCAGATCAAGTACAGCTTCAACATTCCTATGATTCTGTAGCTAACTTTGTTGGTGAAGATGAAGATTCTATTCCAAGTAAAATGTATTTGGATGAAACTCCAGAATATTTTGTTAATGTAGAAGCATATGAGAGTGGTAGTGG(4)阴性对照管：管内试剂为重组阴性质粒DNA；(5)标准品管：管内试剂分别为107、106、105copy/ml的重组阳性质粒DNA各一支；(6)聚合酶管：管内试剂为5U/μlTaqDNA聚合酶管；(7)去离子水管：管内试剂为去离子水；