关中奶山羊酪蛋白基因启动子表达载体

摘要：

本发明涉及一种用关中奶山羊酪蛋白基因启动子区域构建的表达载体。特征是载体DNA序列中包含关中奶山羊乳腺组织中β-酪蛋白基因的启动子及其周围的调控序列以及β-酪蛋白基因的第一内含子、第一外显子和第二外显子及其信号肽6.5kb；将这段6.5kb长的序列插入商售的质粒载体中，构建得到含关中奶山羊β-酪蛋白基因启动子区域序列的重组质粒，DNA序列全长为6.5kb加上商售的质粒载体序列；实验结果充分说明所克隆的6.5kb DNA序列具有启动子和增强子活性。用本启动子构建的表达载体能够用于建立转基因山羊乳腺生物反应器，使用基因工程手段所构建的目的蛋白特异性地在山羊乳腺中表达、并分泌到山羊乳汁中，以供制备生产目的蛋白。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200410073164.3

申请日期：2004-10-11

公开/公告号：CN1661018

公开/公告日：2005-08-31

主分类号：C12N15/63

申请/专利权人:中国人民解放军第四军医大学

发明/设计人:陈苏民;梁克明;董德文

主申请人地址:710025陕西省西安市长乐西路15号

专利代理机构:西安通大专利代理有限责任公司

代理人:孙枫

国别省市代码:陕西;61

权利要求：

1、关中奶山羊酪蛋白基因启动子表达载体，具有商售质粒载体和β-酪蛋白基因启动子及其周围的调控序列以及第一内含子、第一外显子和第二外显子所构成的β-酪蛋白基因启动子区域，其特征在于：(1)、所述的β-酪蛋白基因启动子区域序列还包括在第二外显子末端引入作为信号肽的限制性核酸内切酶SgfI位点序列；该启动区域序列为-4359～+2106bp，全长6465bp；(2)、所述的β-酪蛋白基因启动子是以西北杨凌特有的高产关中奶山羊的乳腺组织作为来源，从中提取基因组DNA作为模板，设计合成引物，用高保真的DNA聚合酶进行聚合酶链式反应(PCR)，获得的PCR产物，经过拼接、克隆和测定序列而得；(3)、所述的关中奶山羊酪蛋白基因启动子表达载体是将含关中奶山羊β-酪蛋白基因启动区域序列插入商售的质粒载体中后得到的关中奶山羊β-酪蛋白基因启动子表达载体，其DNA序列全长是关中奶山羊β-酪蛋白基因启动区域序列全长6465bp与商售的质粒载体序列全长之和。