一种检测多药耐药基因多态性的方法
本发明属医学检验领域,涉及临床个体基因型的测定方法,具体涉及一种检测多药耐药基因多态性的方法。本发明方法采用变性高效液相色谱技术,检测多药耐药基因C3435T的单核苷酸多态性,敏感度和特异性可达96%~100%,明显高于常用的变性梯度凝胶电泳、温度梯度凝胶电泳、单链构像多态性和限制性片段长度多态性等变异检测技术;检测结果显示与DNA测序法完全相符。与直接测序法比较,本发明方法灵敏度和精确度高,检测更快速,成本更低。可用以预测病人服药后血药浓度与基因型的关系。
发明专利
CN200410067063.5
2004-10-11
CN1673391
2005-09-28
C12Q1/68
复旦大学附属华山医院
钟明康;梁惠琪;焦正
200031上海市乌鲁木齐中路12号
上海正旦专利代理有限公司
包兆宜
上海;31
1、一种检测多药耐药基因多态性的方法,其特征是包括下述步骤,①样品预处理:抽取测试者全血,提取基因组DNA;②PCR反应:设计多药耐药基因(Genbankaccessionno:AC005068)第26外显子C3435T位点的引物,进行PCR反应,扩增出包括C3435T位点的产物;③DHPLC检测SNPs:直接用变性高效液相色谱分析上述PCR产物,其中,变性温度为58~65℃,流动相起始为45%~50%的A液和50%~55%的B液组成的梯度溶液,A液含0.1mol的三乙胺醋酸盐溶液,B液含0.1mol三乙胺醋酸盐溶液和20%~25%v/v的乙腈溶液;结束梯度为35%~40%的A液和60%~65%的B液;以0.5ml/min~1.0ml/min的速度带至DNA分离柱,洗脱液为100%的D液,其中含73%~77%v/v乙腈溶液。④根据洗脱峰形判断基因的多态性。