一种双T-DNA载体及其在无选择标记转基因水稻培育中的应用

摘要：

本发明提供一种含有双T-DNA结构区的简便农杆菌双元载体，以及利用此载体系统培育无抗性选择标记转基因水稻的方法。该系统借助于根瘤农杆菌介导的共转化原理，在一个双元载体上含有两个独立的T-DNA结构区段，其中的第一个T-DNA区含有抗生素抗性选择标记基因，而第二个T-DNA区含有一个通用的多克隆位点，可任意插入目的基因。该双T-DNA载体分子量小，易于克隆操作，在其含多克隆位点的T-DNA区上克隆入目的基因及其必要的调控系列后，实现对水稻的共转化；经自花授粉，在其自交后代中选育含有目的基因、而已剔除了选择标记基因的转基因个体，从而消除因为选择标记的存在而对转基因植物商业化生产等可能带来的负面影响。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200410064691.8

申请日期：2004-09-20

公开/公告号：CN1597969

公开/公告日：2005-03-23

主分类号：C12N15/82

申请/专利权人:扬州大学

发明/设计人:刘巧泉;辛世文;于恒秀;顾铭洪

主申请人地址:225009江苏省扬州市大学南路88号

专利代理机构:扬州苏中专利事务所

代理人:胡定华

国别省市代码:江苏;32

权利要求：

1.一种双T-DNA载体及其在无选择标记转基因水稻培育中的应用，其特征在于：(1)制备含有两个T-DNA结构域的农杆菌双元载体，称为双T-DNA双元载体，其中第一个T-DNA区上含有可用于筛选转化植物细胞的抗生素抗性选择标记基因，第二个T-DNA区上含有一个通用的多克隆位点，可方便地克隆入目的基因。(2)在第二个T-DNA区克隆入用于改良作物的目的基因，再用该载体系统借助于根瘤农杆菌介导的共转化方法转化受体水稻，可期望借助于一个农杆菌将两个独立的T-DNA区导入同一个水稻细胞中，并整合到不同染色体或同一染色体的不同位置上，从而可在分离后代中获得只含目的基因、无抗性选择标记基因的转基因水稻植株。