一种检测口蹄疫病毒的荧光定量PCR试剂盒及应用

摘要：

本发明公开了一种检测口蹄疫病毒的荧光定量PCR试剂盒及应用，该试剂盒利用荧光探针(TaqMan)和正义引物、反义引物并直接以体外转录RNA标准品作为逆转录和扩增的双重对照，使得定量结果更加准确、可靠。可高效方便地对病毒疫苗的效价进行定量检测和质量监控及对口蹄疫爆发疫情进行实时监控，同时可广泛用于动物产品的进出口及动物食品的安全检测，也可为相关基础研究提供技术支持，应用前景十分广泛。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200410061422.6

申请日期：2004-12-24

公开/公告号：CN1661088

公开/公告日：2005-08-31

主分类号：C12Q1/68

申请/专利权人:武汉大学

发明/设计人:郑从义;顾潮江;屈三甫

主申请人地址:430072湖北省武汉市武昌珞珈山

专利代理机构:武汉宇晨专利事务所

代理人:王敏锋

国别省市代码:湖北;42

权利要求：

1.一种检测口蹄疫病毒的荧光定量PCR试剂盒，该试剂盒含有：a)RNA抽提液，b)逆转录酶和热启动TaqDNA聚合酶，c)RNA酶抑制剂，d)引物和TaqMan探针，e)标准阳性RNA模板，f)RT-PCR荧光定量反应液，其特征是：引物序列分别为正义引物：5’-GAACACATTCTTTACACCAGGAT-3’，反义引物：5’-CATATCTTTGCCAATCAACATCAG-3’，扩增子大小为121bp，荧光探针序列为：5′FAM-ACAACCTACCGCCGAGCCAATTC-TAMRA-3′，探针的5′端标记荧光发射基团FAM，靠近3’端标以荧光淬灭基团TAMRA，标准阳性RNA模板由已插入口蹄疫病毒3D区121bp片段的pGEM-T载体转化大肠杆菌DH5α，增殖后提取质粒进行体外转录制备RNA，并于紫外分光光度计测A260定量并10倍梯度稀释。