一种生物多糖高分子微球固定化β-半乳糖苷酶及其制备方法

摘要：

一种生物多糖高分子微球固定化β-半乳糖苷酶及其制备方法，以罗望子胶、沙蒿胶、黄原胶、瓜尔豆胶等生物多糖高分子材料制备的微球为载体通过戊二醛交联法固定化β-半乳糖苷酶。该固定化酶，活力为2.0-2.6u/g载体，活力回收率为51-62％。固定化酶稳定性提高，最适宜pH值为8.0-8.4，最适宜温度为41℃-43℃，表观米氏常数(Km)为6.05×10^-4-6.75×10^-4。罗望子胶、沙蒿胶、黄原胶、瓜尔豆胶等生物多糖高分子材料作为载体固定化β-半乳糖苷酶可将乳糖水解为β-半乳糖和葡萄糖，无毒、生物相容性好、易于回收和重复使用，可应用于低乳糖乳制品的生产。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200410057257.7

申请日期：2004-08-30

公开/公告号：CN1587404

公开/公告日：2005-03-02

主分类号：C12N11/10

申请/专利权人:西北师范大学

发明/设计人:张继;曾家豫;王云普;王永峰

主申请人地址:730070甘肃省兰州市安宁东路805号

专利代理机构:北京正理专利代理有限公司

代理人:毛燕生

国别省市代码:甘肃;62

权利要求：

1.一种生物多糖高分子微球固定化β-半乳糖苷酶制备方法，其特征是：步骤如下，步骤1：在50ml水中，加入胶体物，及有机石蜡、乙酸乙酯、span-80，在500rpm/min的转速下搅拌20min，缓慢滴加甲醛3ml，搅拌1hr，倾去上清液，用石油醚、丙酮洗涤，再用无水乙醇作溶剂洗涤若干次，得胶体物微球；步骤2：所得胶体物微球再用3.0％的对氨基苯磺酸溶液处理，真空干燥，即得表面羟基被对氨基苯磺酸磺酰化的胶体物微球；步骤3：称取上述微球2g，加入380u/100ml的β-半乳糖苷酶液2.0ml，加入0.4％的戊二醛，在4℃、pH7.3的条件下反应10hr，抽滤，用缓冲液或蒸馏水洗除剩余戊二醛和未交联的酶，直至检测不出蛋白质，即得胶体物微球固定化β-半乳糖苷酶。