rhBACE的表达纯化、活性测定方法及其在药物筛选中的应用

摘要：

本发明涉及重组人beta-分泌酶(简称rhBACE)的制备及活性测定方法，由此建立了rhBACE抑制剂筛选系统。本发明将pro-rhBACE克隆到大肠杆菌表达质粒pET28a载体中，构建pro-rhBACE-pET28a重组表达质粒并在E.Coli Rosseta中表达。包涵体中的表达产物溶于6mol/L盐酸胍，经Ni-Sepharose亲和层析纯化后，得到高纯度的pro-rhBACE蛋白。此蛋白在复性液中重新折叠后，于酸性条件(pH4.5)下激活，切去酶原序列，产生有活性的rhBACE蛋白。本发明利用人工合成的荧光17肽底物测定rhBACE活性。本方法制备的rhBACE可用于开展对阿尔茨海默病发生机理的研究及抗阿尔茨海默病药物的筛选。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200410055549.7

申请日期：2004-08-04

公开/公告号：CN1706945

公开/公告日：2005-12-14

主分类号：C12N15/12

申请/专利权人:南京大学

发明/设计人:刘建宁;王石泉;郭志刚

主申请人地址:210093江苏省南京市汉口路22号

专利代理机构:南京天华专利代理有限责任公司

代理人:夏 平

国别省市代码:江苏;32

权利要求：

1、一种重组人beta-分泌酶蛋白的表达纯化、活性测定方法，其特征在于：a.克隆重组人beta-分泌酶蛋白基因，连接到质粒表达载体中，利用大肠杆菌进行表达，表达产物为beta-分泌酶蛋白；b.表达产物利用Ni-NTA亲和柱进行纯化；c.纯化产物经激活后用荧光底物进行活性测定。