以水溶性共轭聚合物为敏感材料的基因探针的构建方法

摘要：

本发明涉及一种以水溶性共轭聚合物为敏感材料的基因探针的构建方法。它以水溶性共轭聚合物为敏感材料，以核酸肽PNA为分子识别元件，以DNA单链作为捕捉探针；将核酸肽PNA结合到水溶性共轭聚合物上，连接于PNA分子上的荧光猝灭剂导致水溶性共轭聚合物荧光猝灭，PNA分子与目标单链杂交后，使得PNA分子上的荧光猝灭剂离开水溶性共轭聚合物，水溶性共轭聚合物荧光恢复，从而实现对目标单链的检测。本发明简化了探针的构建方法，使得线性探针容易与目标单链杂交结合，可广泛运用于分子生物学、临床诊断及各种生化分析。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200410053063.X

申请日期：2004-07-22

公开/公告号：CN1600866

公开/公告日：2005-03-30

主分类号：C12Q1/68

申请/专利权人:复旦大学

发明/设计人:黄维;陈国平;范曲立

主申请人地址:200433上海市邯郸路220号

专利代理机构:上海正旦专利代理有限公司

代理人:陆飞%沈云

国别省市代码:上海;31

权利要求：

1、以水溶性共轭聚合物为敏感材料的基因探针的构建方法，其特征是以水溶性共轭聚合物为荧光指示剂，以核酸肽PNA为分子识别元件，通过一段线性的DNA单链将核酸肽PNA结合到水溶性共轭聚合物上；其步骤如下：(1)石英玻璃表面清洗后进行活化处理；(2)通过自组装或者共价键方法在石英玻璃上固定带正电荷的水溶性共轭聚合物；(3)设计并合成单链DNA作为捕捉探针DNA；(4)设计并合成核酸肽PNA分子链作为分子识别元件；(5)将(4)得到的核酸肽PNA分子的5′端通过共价键连接的方法连接上水溶性共轭聚合物的荧光猝灭剂；(6)将步骤(3)得到的捕捉探针DNA和步骤(5)得到的PNA按照摩尔比为0.9∶1～1∶0.9关系配置成混合溶液；(7)将步骤(2)所得的固定有水溶性共轭聚合物的玻璃放置于步骤(6)所得的混合溶液中，控制温度使得捕捉探针DNA与PNA分子杂交，同时捕捉探针DNA通过静电作用与(2)得到水溶性共轭聚合物结合在一起，从而将PNA分子锚定于石英玻璃表面上的水溶性共轭聚合物上；(8)取出玻璃后做进一步干燥处理，即得到针对特定碱基序列的目标单链的探针。