SARS冠状病毒RNA磁性捕获方法及应用该方法的PCR检测

摘要：

本发明提供了一种SARS冠状病毒RNA的捕获方法。具体的是使用生物素标记的捕获探针与包被了亲和素的磁珠结合，通过捕获探针捕获标本中的靶RNA，再用磁力架收集，并洗涤。该捕获方法可去除标本中的蛋白质、非靶RNA和抑制PCR的物质，使靶RNA得到纯化；该方法可同时对靶RNA进行浓缩富集，起到提高靶RNA浓度的目的。此外，本发明还提供了一种双探针捕获方法。在用捕获探针捕获靶RNA前，用预杂交探针与样本中的靶RNA进行预杂交，打开靶RNA的二级结构，进一步提高捕获效率。本发明还提供了一种SARS冠状病毒RNA的RT-PCR检测方法，该方法采用上述捕获方法捕获靶RNA，可大大提高检测的敏感度，有利于对患者进行早期诊断。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200410047959.7

申请日期：2004-06-14

公开/公告号：CN1712544

公开/公告日：2005-12-28

主分类号：C12Q1/68

申请/专利权人:蔡剑平

发明/设计人:蔡剑平;黑爱莲

主申请人地址:100054北京市丰台区草桥东路16-4022

专利代理机构:北京德琦知识产权代理有限公司

代理人:王 琦%宋志强

国别省市代码:北京;11

权利要求：

1、一种SARS冠状病毒RNA的捕获方法，该方法包括如下的步骤：1)清洗表面包被有亲和素的磁珠，以清除RNA酶，防止RNA的降解；2)将捕获探针P1在5’端用生物素进行标记；3)将清洗过的磁珠与适量经标记的捕获探针P1混合，通过生物素和亲和素的特异结合，使捕获探针P1包被在磁珠表面，4℃保存；4)将标本用TRIzolLS裂解；5)向步骤4)所得溶液中加入包被有捕获探针P1的磁珠，使捕获探针P1捕获SARS冠状病毒RNA；和6)用磁力架收集经步骤5)的溶液中的磁珠，洗涤后，将其溶于适量的DEPC水中，-80℃保存；其中捕获探针P1的序列为：5′-GTAGCCTGGTTAATGTGC-3’；所述标本选自患者的血清、血浆、唾液、尿液、脑脊液或呼吸道分泌物中的一种。