东北虎毛发DNA的提取方法及微卫星DNA标记引物序列
东北虎毛发DNA的提取方法及微卫星DNA标记引物序列。将毛发的根部放入灭菌的离心管中，分别用双蒸水冲洗和无水乙醇浸洗，室温干燥；加入0.5ml含有Tris-HCl、EDTA、NaCl的混合液，其中还含SDS、DTT和蛋白酶K，得到液体A；对液体A进行两次提取，多次分离后，最后获得DNA样品E；从E获得东北虎微卫星DNA标记引物序列为：Pti002：5’-GCATCTAATATCTTGCCTG-3’5’-TTCTGAAATAGGATTGGC-3’；Pti003：5’-CCTTCCAGGATGCCACTC-3’5’-TTATTCTCATGCACATTTTCAGA-3’；Pti007：5’-ATCAGGAGTTCTATCACC-3’5’-CATG ATTAGGGAGTTGAG-3’；Pti010：5’-GGGACAACTGAGAGAAGA-3’5’-CAAGATATGTTCTCAGACTG-3’。
发明专利
CN200410047907.X
2004-06-10
CN1706958
2005-12-14
C12P19/34
李迪强%张于光
李迪强;张于光
100091北京市海淀区中国林科院森林生态环境与保护研究所
北京;11
1.东北虎毛发DNA的提取方法及微卫星DNA标记引物序列，其特征是：将东北虎毛发的根部放入灭菌的离心管中，用双蒸水冲洗后，无水乙醇浸洗，室温干燥；加入0.5ml含有三羟甲基氨基甲烷盐酸(Tris-HCl)、乙二胺四乙酸(EDTA)、氯化钠(NaCl)的混合液，其中还含十二烷基苯磺酸钠(SDS)、二硫苏糖醇(DTT)和蛋白酶K，得到液体A，于37℃水浴保温过夜；然后对液体A进行两次提取：第一次在A中加入等体积饱和酚，中速离心10分钟后抽提上清液得到溶液B1，并且重复此步骤一次得到溶液B2；第二次在B2中加入等体积氯仿，中速离心10分钟后抽提上清液得到溶液C1，然后重复此步骤一次得到溶液C2；在C2中加入1/10体积的醋酸钠溶液和2.5倍体积的冰无水乙醇，-20℃过夜；高速离心10分钟弃上清获得D，用70％冰乙醇洗D一次，离心8分钟后真空干燥，溶于适量的缓冲液中得到DNA样品E，并于-20℃保存；通过PCR扩增从E获得东北虎微卫星DNA标记引物序列。