检测微转移的方法

摘要：

检测取自受试者的肿瘤非原发病灶区域的样本中肿瘤细胞微转移的方法，所使用的第一引物与来源于肿瘤细胞RNA的部分特异序列具有互补性，第二引物与部分该特异序列同源(两引物中的任一引物在其5’端还额外含有能与RNA聚合酶结合的启动子序列)，所述方法包括以下步骤(1)以所述特异序列作为模板，在具有RNA依赖的DNA聚合酶活性的酶的作用下合成cDNA，(2)用具有RNA酶H活性的酶降解RNA-DNA双链中的RNA链(得到单链DNA)，(3)以该单链DNA作模板，在具有依赖DNA的DNA聚合酶活性的酶的作用下形成具有启动子序列的双链DNA，此双链DNA能被转录为与所述特异序列同源或互补的RNA，和(4)在具有RNA聚合酶活性的酶的作用下转录双链DNA得RNA转录本(该RNA转录本在后续的反应1中进行cDNA合成时作为模板)。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200410047708.9

申请日期：2004-04-30

公开/公告号：CN1572886

公开/公告日：2005-02-02

主分类号：C12Q1/68

申请/专利权人:东曹株式会社

发明/设计人:大仲悟;林俊典

主申请人地址:日本山口县

专利代理机构:北京市中咨律师事务所

代理人:黄革生%林柏楠

国别省市代码:日本;JP

权利要求：

1.对获自受试者的肿瘤非原发病灶区域的样本检测肿瘤细胞微转移的方法，其中所使用的第一引物与来自肿瘤细胞的RNA的部分特异序列互补，第二引物与部分该特异序列同源(两引物中的任一引物在其5’端还额外含有能与RNA聚合酶结合的启动子序列)，所述方法包括以下步骤(1)以所述特异序列作为模板，在具有RNA依赖的DNA聚合酶活性的酶的作用下合成cDNA，(2)用具有RNA酶H活性的酶降解RNA-DNA双链中的RNA链(以产生单链DNA)，(3)以该单链DNA作模板，在具有依赖DNA的DNA聚合酶活性的酶的作用下形成具有启动子序列的双链DNA，此双链DNA能被转录为与所述特异序列同源或互补的RNA，和(4)在具有RNA聚合酶活性的酶的作用下将双链DNA转录为RNA转录本(该RNA转录本在后续的反应1中进行cDNA合成时作为模板)。